Ethachinmate共沉淀剂

Ethachinmate

◆原理

       共沉淀剂Ethachinmate是基因工程学的标准时机。作为畅销产品，效果显著。
       Ethachinmate适用于核酸（DNA与RNA）乙醇或isopropanol沉淀时的丙烯酰胺系高分子载体溶液，在盐类存在的情况下（例如 ＞0.1mol/L Sodium Acetate）加上Ethachinmate进行酒精沉淀，能得到如下优点。

 

◆优点・特色

● 可回收微量核酸
   可定量性回收20ng/mL以上的DNA（＞100个碱基对）及（＞120个碱基）。
● 乙醇沉淀迅速
   无需-20℃或-80℃孵化，添加乙醇后可直接离心。
● 酶反应无障碍
   回收的核酸，在水及缓冲液中容易溶解。混在一起的Ethachinmate完全不阻碍酶反应。
● 沉淀可观察到
   因为Ethachinmate自己根据究竟沉淀形成沉淀，无需担心微量核酸冲洗了重要样品。

无DNase，RNase活性测试剂

 

用一下DNase及RNase free方法可确认是否含有Ethachinmate

 

DNase实验：向1μgλ/Hin d III 中加入3μLEthachinmate，在37℃的恒温箱中放置16小时候，进行琼脂糖凝胶电泳，图像确认无变化。

RNase实验：向2μg 16S及23S的rRNA中加入3μL Ethachinmate，在37℃的恒温箱中放置16小时后，进行琼脂糖凝胶电泳，图像确认无变化。

 

 

◆使用方法

DNA或者RNA溶液（100μL）

↓←3 mol/L Sodium Acetate（添加），3,3μL*1）

↓←Ethachinmate 1μL*2）

↓←涡流

↓←2~2.5倍量的乙醇

↓涡流*3）

↓10kgxg室温下反应5分钟*4）

沉淀*5）

 

 

*1）（氯）盐的最终浓度必须在0.1mol/L以上

*2）每100μL DNA或RNA溶液中加入1μL  Ethachinmate。但溶液量为300μL以上时，加入3μL可达到饱和。

*2）而且再次进行上述操作时，无需添加Ethachinamte。　（若反复添加Ethachinmate会导致DNA溶液变

*2）得黏稠，影响到后面的操作。）

*3）进行充分混匀，可实现微量DNA的定量回收。

*4）不必进行冷却

*5）沉淀可目测。溶解于其他缓冲液等中，可直接作为各种酶底物使用。而且，必须用70%的乙醇进行洗涤。

Q：    有没有DNase，Rnase杂质？
A：    没有。Ethachinmate用以下的方法可以确认无DNae、RNase活性。
          Dnase 实验：向1μg的/Hin d III中加入3μL Ethachinmate，在37℃的恒温箱中放置16小时候，进行琼脂

          糖凝胶电泳，图像确认无变化。
          RNase实验：向2μg 16S及23S的rRNA中加入3μL Ethachinmate，在37℃的恒温箱中放置16小时后，进

          行琼脂糖凝胶电泳，图像确认无变化。

Q：    可以使用RNA回收吗？
A：    没有问题。

Q：    高效回收的核酸浓度和核酸链长度是多少？
A：    可回收几乎所有的20ng/ml 以上的DNA（100bp以上）及RNA（120 base以上）。

Q：    260nm的吸光度会影响定量吗？
A：    无影响。

Q：    100μL DNA溶液对应加入1μL Ethachinmate。若DNA溶液少于100μL，应该怎样做才好？
A：    请加入1μL Ethachinmate。为了DNA沉淀可目测，需要1μL以上的Ethachinmate。另外，3M Sodium

          Acetate及1μL的Ethachinmate。

Q：    300μL以上的DNA溶液，Ethachinmate的添加量是多少？
A：    DNA溶液为300μL以上，无论DNA溶液的量是多少，都请加入3μL Ethachinmate。无需加入过量的Eth-

          achinmate。另外，3M Sodium Acetate请按此比例换算适量添加。
          例：DNA溶液为600μL，则加入19.8μL的3M Sodium Acetate及3μL的Ethachinmate

Q：    DNA溶液进行2次以上乙醇沉淀时，最好第二次以后也每次加上Ethachinmate吗？
A：    Ethachinmate添加一次无需再添加，如果重复添加Ethachinmate，DNA溶液会变得黏稠，将阻碍以后的

          操作。

Q：    冷冻时，会不会影响Ethachinmate的效果？
A：    不会

Q：    高压处理会不会影响Ethachinmate的效果？
A：    不会

Q：    如果用苯酚/氯仿处理含Ethachinmate的DNA溶液，会不会影响Ethachinmate的效果？
A：    不会

Q：    对电泳模型有没有影响？
A：    没有，但根据电泳条件的不同，数十kbp以上的DNA会产生宽频带条。

Q：    对限制性内切酶反应有没有影响？
A：    没有。

Q：    对T4 DNA Ligase反应有没有影响？
A：    没有。

Q：    对AMV Reverse Transcroptase的cDNA合成反应有没有影响？
A：    没有。

Q：    对使用Taq DNA Polymerase的PCR反应有没有影响？
A：    没有。

Q：    对Klenow Flagment反应有没有影响？
A：    没有。

Q：    对大肠杆菌的转化有没有影响？
A：    没有。

Q：    对in vitro组装有没有影响？
A：    λ 噬菌体的in vitro组装效率稍微下降。

Q：    加入Ethachinmate，乙醇沉淀会形成核苷酸沉淀吗？
A：    使用8mer及17mer的的低聚核苷酸进行实验，与是否添加Ethachinmate无关，回收率没有变化。

Q：    在含有甲酰胺的杂交溶液中有无变性吗？
A：    无变性。

Q：    对blotting有没有影响？
A：    没有。

Q：    对序列反应有没有影响？
A：    不影响使用ABI Prism 377的周序列反应。对脱氧发的序列反应也没有影响。

Q：    添加Ethachinmate是否有助于从管中脱落沉淀？
A：    要看管的材质。比如Eppendorf公司制的Safe-Lock管有容易脱落的倾向。