钙离子定量检测荧光探针Fura 2-AM
| 钙离子定量检测荧光探针Fura 2-AM | |||
| 产品编号： | F025 | CAS号： | |
| 分子式： | 分子量： | ||
| EINECS编号： | |||
Fura 2是最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一，Fura 2-AM(钙离子荧光探针)需用无水DMSO(anhydrous DMSO)溶解。
Fura 2对Quin 2的荧光特性做了改进。1 μM Fura 2结合后的信号强度相当于30 μM的Quin 2结合后的信号强度。这样就保证在实验中可以使用比Quin 2的浓度低得多的Fura 2指示剂。Fura 2是一种使用最广泛的比率测量的钙荧光指示剂。目前适用于Fura 2实验的设备有很多，它特别适合于用数字成像显微镜来检测。它比Indo 1更不易受到光褪色作用的影响。细胞形状的改变有时候会影响340 nm和380 nm的荧光比率，比如，平滑肌收缩会同时引起这些波长的荧光信号强度的减小。另外，对于血管来说，340 nm的信号强度的增加会因为血管收缩而趋向于变小，而380 nm信号强度的减小会因为血管收缩而变大。Fura 2-AM是Fura 2的一种乙酰甲酯衍生物，通过培养，能够轻易地负载到细胞中。
Fura 2可以和钙离子(Ca2+)结合，结合钙离子后在330-350 nm激发光下可以产生较强的荧光，而在380 nm激发光下则会导致荧光减弱。这样就可以使用340 nm和380 nm这两个荧光的比值来检测细胞内的钙离子浓度，可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，荧光探针的渗漏，细胞厚度差异等一些误差因素。
Fura 2-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fura 2-AM的荧光比较弱，最大激发波长为369 nm，最大发射波长为478 nm，并且其荧光不会随钙离子浓度改变而改变。Fura 2-AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura 2，从而被滞留在细胞内。Fura 2和钙离子结合后，最大激发波长为335 nm(最大激发波长随离子浓度的的不同而有所不同)，最大发射波长为505nm。实际检测时推荐使用的激发波长为340nm，发射波长为510 nm。如果做双波长检测，则推荐使用的激发波长为340 nm和380 nm。
操作说明 (for NG 108-15/ Neuronal Cell Line)*
试剂:
Hanks’balanced salt solution (HBSS)
HEPES buffer saline (
操作:
1. 用含有5%的胎牛血清的DMEM在玻璃底培养皿中培养细胞。
2. 将培养液换成
3. 用HEPES buffer saline来稀释
solution。
4. 除去培养液，加入0.5 ml 的Fura 2-AM working solution。
5. 培养20分钟，然后除去Fura 2-AM working solution。
6. 用HEPES buffer saline洗涤细胞一次，然后将细胞在HEPES buffer saline中培养1小时。
7. 将此细胞用于荧光钙离子检测。
8. 激发波长380 nm（游离钙）和340 nm（结合钙），发射波长510nm。
*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。
视网膜双极细胞钙离子浓度定标测定
（A）分离的视网膜双极细胞预孵育2 ug/ml 的Fura-2 AM 20分钟，且存在有ionomycin时，分别在无钙、
图像处理软件SimplePCI6，CCD Hamamatsu ORCA-ER，显微镜Olympus倒置显微镜IX70，40倍油镜。
（复旦大学神经生物学研究所 杨雄里院士 提供照片）
染色实例2：
染色实例3：
