不动杆菌属菌,医疗环境,包括自然环境中广泛存在的机会感染细菌。另外,抗菌药耐药性不动杆菌属菌高度表现也包含监视,医疗相关感染的对策上重要。
名古屋大学的荒川先生及爱知县卫生研究所的铃木老师所开发的PCR -根据ORF Typing(POT法)中,多路聚合酶链反应,用不动杆菌属菌保有多数特定基因领域进行放大,琼脂糖凝胶电泳法而被分离的乐队模式的数值化,菌种简易鉴定及A . baumannii的菌株识别和国际流行克隆的识别。
*本试验法,厚生労働科学研究费补助金新兴·复兴对感染症的创新医药品等开发推进事业(H 24 -新兴-一般- 010)开发的东西。
特长
菌种简易鉴定(<em>A . baumannii</em>,<em>A . pittii</em>,<em>A . nosocomialis</em>,A . sp . close to 13 TU)可能
<em>A . baumannii</em>菌株能够识别
<em>A . baumannii</em>的国际流行克隆(微星科技cloneⅠ、Ⅱ)能够识别
Multilocus Sequence Typing(MLST)法和几乎同等的识别能力
配套元件的构成(30回)
|
个别名称 |
容量 |
数量 |
试剂A |
AptaTaq DNA主人(5×Conc .)* |
240μL |
一本书 |
试剂B |
PCR附录 |
240μL |
一本书 |
试剂C |
引物混合α |
120μL |
一本书 |
试剂D |
混合β引物 |
120μL |
一本书 |
试剂E |
积极控制 |
240μL |
一本书 |
试剂F |
6×装入缓冲区(BPB·XC) |
240μL |
一本书 |
* AptaTaq DNA主人(5×Conc设置Roche Diagnostics K . K .的商品。
操作步骤
① |
分离的菌株纯培养 |
② |
DNA抽出,进行模板DNA制备 |
③ |
两种多路PCR |
④ |
琼脂糖凝胶电泳 |
⑤ |
乐队的读取模式 |
差 |
POT值的计算 |
⑦ |
各样品的POT值的比较分析 |
解析
电泳模式
50 : 50个基点DNA梯形电脑:积极的控制1,2:A . baumannii(ST 2)同一事例得到的临床分离股票3:A . baumannii(ST 2)4:A . baumannii(ST 2)多药耐药性A . baumannii
5:A . baumannii(ST 1)ATCC®BAA 16056:A . baumannii(ST 1)7:A . baumannii(ST 152)8:A . baumannii(ST 34)9:A . pittii10:A . nosocomialis11:<em>A .</em>close to sp .A . nosocomialis
名古屋大学的荒川宜親老师和爱知县卫生研究所匡弘铃木老师的厚意,通过电泳模式的实例数据为您提供领受了。
检测ORF的种类(目标区域)及其PCR扩增产物尺寸
|
POT No . |
放大尺寸(bp) |
目标领域 |
Reactionmixture 1 |
PCR PC |
553 |
atpA |
A . baumannii |
465 |
OXA – 51 |
A . pittii |
401 |
Specific gene |
A . nosocomialis |
362 |
Specific gene |
<em>A .</em> sp close TU to 13 . |
321 |
Specific gene |
POT 1 – 1 |
271 |
Genomic Islet – 1 |
POT 1 – 2 |
231 |
Genomic Islet – 2 |
POT 1 – 3 |
189 |
Genomic Islet – 3 |
POT 1 – 4 |
151 |
Genomic Islet – 4 |
POT 1 – 5 |
122 |
Genomic Islet – 5 |
POT 1 – 6 |
102 |
Genomic Islet – 6 |
POT 1 – 7 |
81 |
Genomic Islet – 7 |
Reactionmixture 2 |
PCR PC |
565 |
OXA – 51 |
POT 2 – 1 |
457 |
Genomic Island – 1 |
POT 2 – 2 |
388 |
Genomic Island – 2 |
POT 2 – 3 |
329 |
Genomic Island – 3 |
POT 2 – 4 |
280 |
Genomic Island – 4 |
POT 2 – 5 |
237 |
Genomic Island – 5 |
POT 2 – 6 |
公元209 |
Genomic Island – 6 |
POT 3 – 1 |
185 |
Genomic Island – 7 |
POT 3 – 2 |
160 |
Genomic Island – 8 |
POT 3 – 3 |
139 |
Genomic Island – 9 |
POT 3 – 4 |
120 |
Genomic Island – 10 |
POT 3 – 5 |
101 |
Genomic Island – 11 |
POT 3 – 6 |
81 |
Genomic Island : 12 |
①2个多路PCR的电泳结果从乐队读取模式。
②这电泳乐队的有无的结果用,POT值分析用EXCEL表二进法输入,3个类别的POT值计算出。
无论PCR电脑阳性的情况,那个样品已不动杆菌属菌,可以确认。
不论POT值1 1000以下的话A . baumannii,1000以上2000以下的话A . pittii,2000以上3000以下的话A . nosocomialis3000以上,4000以下的话A .close to 13 TU sp .,4000以上的话不动杆菌属菌的细菌种类不明,被判定。
在样品之间的POT值进行比较,A . baumannii菌体间的相同性客观的推测。
兴趣集体感染得菌身体,POT 1~3的POT值全部同一。
范畴 |
样品号码 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
POT 1 |
122 |
122 |
122 |
122 |
69 |
69 |
72 |
104 |
1105 |
2105 |
3105 |
POT 2 |
59 |
59 |
26 |
53 |
46 |
42 |
0 |
8 |
0 |
0 |
0 |
POT 3 |
54 |
54 |
54 |
41 |
59 |
27 |
8 |
0 |
0 |
0 |
0 |
产品信息
产品名 |
包装 |
产品编号 |
鹿genius®分子疫学分析POT配套元件(不动杆菌属菌用) |
一包(30回) |
08062 – 96 |
鹿genius®DNA抽出试剂 |
一包(120次) |
08178 – 96 |
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书是爱知县套件★和名古屋大学专利许可,制造销售。★其他厂商的商品有关的许可证、专利方面,各厂商请确认。★产品规格,产品改良而变更。请您事先了承。
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宣传手册、说明书(PDF)
小册子鹿genius®分子疫学解析配套元件(不动杆菌属菌用)(386 KB)
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