Protein A Sepharose Column
产品介绍
亮点配方:尿激酶在6%交联琼脂糖微球上,以50%的纯甘油浆液提供。
配体密度:0.11 mg/ml树脂。
应用:高效、方便地切割纤溶酶原和其他含有尿激酶特异性裂解位点的重组融合蛋白。
方案:为了找到一个目标蛋白的最佳切割条件,建议在小范围内进行初步的切割反应。尿激酶的成功切割依赖于靶蛋白的正确折叠,使酶能够进入尿激酶识别序列。一旦达到目标酶切的最佳条件,就可以得到整个蛋白质裂解的最佳条件。在建立裂解反应之前,目标蛋白应纯化至均匀,并在50 mM Tris缓冲液、0.1 M NaCl、pH 7.4下透析。
1) 轻轻地旋转着珠子。不要涡流。
2) 将250µl悬浮浆液等分,并将其添加到1 mg Eppendorf管中的目标蛋白质中。我们建议蛋白质体积大于400μl/管,以便于反应过程中的适当混合。
3) 通过倒置试管(不要涡流)轻轻混合,并在37°C的旋转摇床上摇动。
4) 以固定的时间间隔,旋转试管,将试样等分并立即冷冻。反应结束后,用SDS-PAGE分析样品。
裂解目标蛋白的回收:
1) 融合蛋白完全裂解后,将反应混合物在1500 x g下旋转2-3分钟。
2) 去除上清液,并用0.2 ml 50 mM Tris缓冲液、0.1 M NaCl、pH 7.4清洗珠子。
3) 重复步骤1和2以最大限度地回收目标蛋白及其裂解片段。进一步的层析可能需要从目标蛋白中去除裂解片段。
储存条件-20°C
装运条件凝胶包
仅供研究使用!不用于人类。
参数信息 | |
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外观状态: | 固体或粉末 |
质量指标: | 95%+ |
溶解条件: | 有机溶剂/水 |
CAS号: | N/A |
分子量: | N/A |
储存条件: | -20℃避光保存 |
储存时间: | 1年 |
运输条件: | 室温2周 |
生产厂家: | 上海金畔生物科技有限公司 |