1. 1. 产品介绍

乳铁蛋白是近年来国内外开发研究速度最快的一种营养添加剂，由于其具有广谱抗菌、抗病毒感染、调节体内铁平衡、调解骨髓细胞的生成、抑制人体肿瘤细胞、同多种抗生素及抗真菌制剂协同有效治疗疾病等功效，使其产品在国内外乳制品加工中的应用范围日益广泛。

肝素亲和柱能够特异性的纯化样品中的乳铁蛋白，本产品采用了柱状琼脂糖凝胶作为固相载体，琼脂糖凝胶与肝素偶联形成免疫吸附剂，装柱制成免疫亲和柱，能够特异性的纯化样品中的乳铁蛋白，样品前处理后，通过免疫亲和柱净化，乳铁蛋白特异性吸附在亲和柱上，用淋洗液将免疫亲合柱上的杂质除去，用洗脱液通过分离柱，将乳铁蛋白亲和柱上分离下来，最后，将洗脱液注入HPLC或LC-MS进行测定。

1. 2. 用途

适用于乳、乳粉等食品中乳铁蛋白含量测定；样品中乳铁蛋白的净化，提取等。

1. 3. 产品性能

1. 4. 操作流程

结合缓冲液：50 mM磷酸盐缓冲液、pH8.0左右

洗脱缓冲液：50 mM磷酸盐缓冲液，2 M NaCl，pH8.0 左右

（1）样品处理：

（注：适当调节样品称取量，使样品中乳铁蛋白含量应控制在3mg以内。）

①乳粉：精确称取 2g样品，置于玻璃烧杯中，加入已预热至40 ℃左右（不可超过50℃）的结合缓冲液35 mL ，用玻璃棒搅拌使其溶解均匀。将其转移至50 mL 容量瓶中，用少量的结合缓冲液分次洗涤烧杯和玻璃棒，洗涤液一并移入容量瓶中，用结合缓冲液定容至50ml，混匀，倒入50 mL离心管中，在4℃条件下离心（5000r、10min，弃掉上层油脂，底层沉淀，取中间层）或微纤维过滤方式去除油脂和杂质，准确吸取10 mL作为样品液。

②奶液：称取适量样品（以不超过3mg乳铁蛋白载量为原则，例如：普通牛奶中乳铁蛋白参考含量小于0.5mg/g，建议称量10-20g、牛初乳中乳铁蛋白参考含量1-2mg/g，建议称量2-5g），置于50mL容量瓶中，用结合缓冲液定容至50ml，混匀，倒入50 mL离心管中，在4℃条件下离心（5000r、10min，弃掉上层油脂，底层沉淀，取中间层）或微纤维过滤方式去除油脂和杂质，准确吸取10 mL作为样品液。

（2）柱子预处理：取出肝素亲和柱,恢复至室温（22-25℃），将上端塞子取出，打开下端堵头，将柱内保存液流掉至高于凝胶上界面3-5mm处，加入总体积10ml的结合缓冲液平衡柱子（柱子不要走干）。

（3）加样：加入处理好的样品10ml，以流速为1-2滴/秒上样，直至样品全部通过亲和柱至凝胶上界面（柱子不要走干）。

（4）淋洗：加入10mL结合缓冲液淋洗柱子，除去杂质，适当给一些压力，调节流速为1-2滴/秒，直至样品全部通过肝素亲和柱，并排干。

（5）洗脱：加入4ml洗脱缓冲液，调节流速为1-2秒每滴，缓慢洗脱并排干，收集全部洗脱液，以洗脱缓冲液定容至4ml，即为净化后样品。

（6）检测：净化后样品用质谱，高效液相、荧光等方法进行检测。