Co-Berpharose FF-NTA
钴-琼脂糖凝胶FF(NTA)以琼脂糖微球为基质,活化偶联次氮基三乙酸(NTA),之后螯合Co2+。钴 NTA 琼脂糖凝胶 FF 具特异性好,螯合钴更稳定,不易脱落,能耐受更高的还原剂,物理和化学稳定性好。
钴-琼脂糖凝胶FF主要用于纯化含有组氨酸标签(His-Tag)的重组蛋白。组氨酸标签中的咪唑环同过渡金属Ni2+形成稳定的配位键,能特异、牢固和可逆地吸附在固定有Co2+的基质上,可通过增加咪唑浓度对重组蛋白进行竞争洗脱。
2.规格
1ml(预装柱)、5ml(预装柱)、10ml(预装柱)、20ml、100ml、500ml
3.产品性能
性能 | 指标 |
基质 | 6%琼脂糖微球 |
配基 | Co2+ |
载量 | ≥20mg His标签蛋白/ml |
粒径 | 45-165μm |
推荐流速 | 50-300 cm/h |
耐压 | 0.3MPa |
工作温度 | 4-40℃ |
pH稳定范围 | 5-12 |
储存缓冲液 | 20%乙醇 |
储存温度 | 4-8℃ |
4.纯化流程
①平衡
钴-琼脂糖凝胶FF柱用2-5个柱体积的初始缓冲溶液进行平衡。
建议流速为100 cm/h。
②上样
(1)样品一般溶解于pH6-8的初始缓冲液中。提高上样缓冲液的pH值可以增大载量。
(2)缓冲液中不能含有EDTA和柠檬酸盐,同时最好避免巯基乙醇、DTT等还原剂。
(3)常用缓冲液有10-100 mM磷酸钠缓冲液、20-200 mM Tris-HCl缓冲液等。
(4)缓冲液中一般要加入0.15-0.5 M的NaCl以消除离子交换作用。
(5)初次使用钴-琼脂糖凝胶FF时,推荐使用50 mM PBS(50 mM NaH2PO4、0.5 M NaCl、pH 7.4)作为初始缓冲液。
③洗脱
(1)增加咪唑浓度进行洗脱是钴-琼脂糖凝胶FF最常用的洗脱方法。
(2)咪唑为碱性,相应缓冲液配制后需要用HCl调节pH值。
(3)初次使用钴-琼脂糖凝胶FF时,如不确定洗脱需要的咪唑浓度,推荐在初始缓冲液中分别加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、500 mM咪唑,浓度从低
到高分别洗脱和收集重组蛋白,之后通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱结果。
(4)有条件的可以进行咪唑梯度线性洗脱以确定较佳的洗脱条件。
参数信息 | |
---|---|
外观状态: | 固体或粉末 |
质量指标: | 95%+ |
溶解条件: | 有机溶剂/水 |
CAS号: | N/A |
分子量: | N/A |
储存条件: | -20℃避光保存 |
储存时间: | 1年 |
运输条件: | 室温2周 |
生产厂家: | 上海金畔生物科技有限公司 |