1.产品介绍

同普通蛋白A琼脂糖凝胶相比，耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF大大提高了凝胶的耐碱性，可以使用0.1-0.5MNaOH溶液去除热源或对凝胶进行清洗。琼脂糖凝胶骨架上的延伸碳臂和重组耐碱蛋白A上的定向结合位点的设计保证了两者之间的定向牢固键合以及耐碱蛋白A同抗体间的高效亲和能力。

2.规格

1ml（预装柱）、5ml（预装柱）、10ml（预装柱）、25ml、100ml、500ml、1L

3.产品性能

4. IgG与蛋白AG结合强度比较

5.纯化流程

应用举例：

结合缓冲液：20mM磷酸缓冲液、150mMNaCl、pH7.0

洗脱缓冲液：0.1M甘氨酸，PH3.0或0.1M柠檬酸缓冲液，pH 4.0

中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 8.5

1) 1ml耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF预装柱用5-10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液。

2)用结合缓冲液平衡5-10个柱床体积。

3)将5ml人多抗血清用结合缓冲液稀释到50ml，0.45μm滤膜过滤上样。

4)用结合缓冲液再洗5-10个柱床体积。

5)用洗脱缓冲液洗脱抗体，收集洗脱峰，并用中和缓冲液调节其pH至中性。

6)每次使用后依次使用3个柱体积的结合缓冲液，5个柱体积的去离子水，5个柱体积的20%的乙醇平衡保存，防止填料被细菌污染。

7) SDS-PAGE电泳分析。

6.注意事项

1)样品洗脱后一般pH很低，应立刻用碱性中和缓冲液（如1MTris-HCl，pH8.5）将收集到的抗体溶液中和到中性，或在收集容器中事先装5-10%、pH7.5的缓冲液（如1MTris-HCl或1M磷酸缓冲液），以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。

2)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果。

3)填料再生清洗：随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量下降，严重影响纯化效果，这时需要对填料进行再生清洗（如下步骤）：先用3倍柱体积的结合缓冲液清洗，然后用至少2倍柱体的0.1-0.5 M NaOH清洗，接触时间为15 min，最后用5倍柱体积的结合液冲洗。（注：因0.1–0.5 M NaOH粘度大易造成压力增加，可进行反向冲洗。）

4)本产品保存条件：20%乙醇，4-8℃。