使用CRISPR/Cas9进行基因组编辑的gRNA合成试剂盒

CUGA^® 7 gRNA Synthesis Kit

 

　　CUGA^® 7 gRNA Synthesis Kit是对CRISPR/Cas9基因组编辑系统所需的向导RNA进行合成和纯化的试剂盒。

　　通过使用CUGA^® 7聚合酶（独立开发的T7 RNA Polymerase的突变体）进行体外转录，可以精确并且大量制备目的向导RNA。本试剂盒中包含用于体外转录反应的试剂，以及使用核酸纯化柱进行向导RNA纯化用的整套试剂。

 

◆特点

●　体外转录反应中可大量地合成gRNA。

●　使用专有酶进行精确转录。

●　具有与化学合成的gRNA相同的功能。

 

◆试剂盒组成

<向导RNA合成用试剂>

・CUGA^® 7 Enzyme Solution …….. 50 µL×1支

・5×Transcription Buffer…………….. 200 µL×1支

・0.1 M DTT………………………………. 100µL×1支

・NTP Mix …………………………………. 300 µL×1支

・DNase I (RNase free)……………… 100 µL×1支

 

<向导RNA纯化试剂和核酸纯化柱>

・gRNA Binding Buffer………….. 30 mL×1支

・gRNA wash Buffer……………… 40 mL×1支

・Spin Column……………………… 50支×1袋

・ddWater(RNase free)………… 1 mL×5支

 

※注意
本产品中不包含体外转录反应所需的模板DNA以及模板DNA制备试剂，需另外准备。

 

◆实验步骤

◆实验案例

①  RNA合成量的比较

用CUGA^® 7 gRNA Synthesis Kit（本产品）以及A公司的gRNA合成试剂盒（体外转录法）在37°C，1~4小时的条件下合成single guideRNA（sgRNA）。反应后，根据各个制造商的使用手册纯化sgRNA，比较合成量。

【结果】

本产品的sgRNA合成量为A公司产品合成量的3倍。

②  电泳比较

使用本产品和A公司的gRNA合成试剂盒合成sgRNA，并通过琼脂糖凝胶电泳比较纯化后的sgRNA。

 

【实验条件】

・电泳样本：37℃反应2小时合成的sgRNA 250ng

・电泳凝胶：3% Agarose 21

・2×Loading Buffer组成：95％甲酰胺

　　　　　　　　　　　　 0.5mM EDTA

　　　　　　　　　　　　 0.005% BPB

　　　　　　　　　　　　 0.005% XC

【结果】

本产品合成的sgRNA在电泳中为单一条带，可确认其为精准转录。

 

③  体外切割检验（与化学合成产品比较）

用本产品合成的sgRNA和化学合成的gRNA（tracrRNA，crRNA）在体外进行切割检验

 

【实验条件】

・M：GeneLadder Fast2　5 µL
・C：Control

・1：Cas9 Nuclease protein NLS　2 pmol＋化学合成的gRNA 2 pmol
・2：Cas9 Nuclease protein NLS　2 pmol＋本产品合成的sgRNA 50 ng

・电泳凝胶：0.8%　Agarose S

【结果】

可确认本产品合成的sgRNA与化学合成的gRNA有相同的功能。

◆产品列表

产品编号	产品名称	包装
314-08691	CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit  CUGA® 7 gRNA合成试剂盒	50次用