BINKIT^® NK细胞扩增套装（外周血单核细胞来源）

 

◆原理

 

　　BINKIT^® 可从外周血单核细胞扩增高活性的自然杀伤（NK）细胞。

 

◆优点・特色

 

●　无需饲养层细胞，即可从外周血细胞 (PBMCs)中扩增NK细胞

●　3周时间内NK细胞的数目可扩增几百到几千倍

●　NK细胞将获得增强的细胞杀伤性

●　该试剂盒适合20~50mL的外周血细胞

●　Xeno-free（不含动物来源的材料）

 

 

◆案例・应用

 

<试剂盒组成>

●　NK 细胞初始培养基

●　NK细胞初始培养瓶

●　NK细胞传代培养基

●　BINKIT^® 明细表(PDF格式)

 

<未提供材料>

●　Ficoll 淋巴细胞分层液（GE Healthcare）

●　无菌PBS

●　FBS或自体血浆（56℃加热30分钟以灭活）

 

<结果>

 

图 1 使用BINKIT^® 进行体外NK细胞扩增

利用BINKIT^® 对外周血单核细胞进行NK细胞扩增，CD3-CD56+细胞从15.8％增加到88.6％。

 

图 2 使用BINKIT^® 进行体外NK细胞扩增

利用BINKIT^® 对外周血单核细胞（来自健康自愿者，HD, n=3）进行NK细胞扩增。

细胞计数（左）和倍率的变化（右）表明NK细胞体在外高效扩增。

 

 

图3  使用BINKIT^® 进行体外NK细胞扩增

分别以BINKIT扩增的NK细胞（实线）和从3名志愿者新鲜分离的NK细胞（虚线）来检测NK细胞对K562细胞的杀伤性。

结果表明，扩增后的NK细胞对K562细胞杀伤性显著增强（P<0.01）。

 

<培养步骤>

(1) 准备试剂

在NK细胞初始培养基和NK细胞传代培养基中，加入5% (v/v) 的热灭活FBS或自体血浆。

 

(2) 制备外周血单核细胞（PBMCs）

通过Ficoll密度梯度离心，从人全血中分离外周血单核细胞。

 

(3)清洗NK细胞初始培养瓶

加入10毫升PBS至NK细胞初始培养瓶。倾斜培养瓶使PBS覆盖整个表面。

将培养瓶中液体全部倒出，小心以免刮伤培养瓶的表面。重复洗涤过程两次。

 

(4)从PBMCs中培养NK细胞

将1×10⁶ cells/mL 的PBMCs 悬浮于NK细胞初始培养基中。每1 mL 细胞悬浮液加入40 μL的NK细胞初始混合物。

细胞悬液转移至预洗涤的NK细胞初始培养瓶，在37℃，5％的CO₂培养3天。

 

(5)更换培养基及传代

同贴壁细胞处理一样，转移时置于锥形离心管，200×g离心8分钟。

去除上清，将1×10⁶ cells/mL 的NK细胞悬浮于传代培养基中，培养基内加入5mL

转移后的悬浮细胞置于常规培养瓶中，在37℃，5％ CO₂条件下培养。

每2-3天将 0.8×10⁶ cells/mL 细胞置于完全NK细胞传代培养基中，进行传代培养。

 

<建议培养期>

2 – 3 周

 

注意：试剂仅供科研使用，不可用于临床。 

 

<参考文献>
Xuewen Deng, Hiroshi Terunuma, Mie Nieda, Weihua Xiao, Andrew Nicol,
Synergistic cytotoxicity of ex vivo expanded natural killer cells in combination with monoclonal antibody drugs against cancer cells,
Int Immunopharmacol 14 (2012) 593-605
PMID: 23063974