神经元细胞基础培养基(不含 L-谷氨酰胺)

神经元细胞基础培养基(不含 L-谷氨酰胺)描述使用方法储存/保存方法技术指标产品用途外观

产品描述
描述
        神经元基础培养基用于出产前/胚胎神经元细胞的培养,使用时需添加 B-27(JP9120)或 N-2(JP9121) 添加剂。可应用于海马神经元,大脑皮层和大脑其他区域的神经细胞的培养。该培养基可以在不添加胶质细胞饲养层的情况下,短长期或长期的维持神经细胞的同源群落存活。
        神经元基础培养基不含 L-谷氨酰胺 (Glutamine)、L-谷氨酸和 L-天冬氨酸,必须组合无血清添加剂 (例如 B-27 或 N-2 添加剂),或者血清和 0.5 mM L-谷氨酰胺,再或者血清和 0.5 mM L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液。初次接种平板时,应加 入 25 µM L-谷氨酸。
使用方法
准备培养基:
1、每 100 ml 神经元基础培养基添加 2 ml B27 添加剂(50 X),并加入终浓度 0.5 mM 的 L-谷氨酰胺 (Glutamine)或 L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液;或者每 100 ml 神经元基础培养基添加 1 ml N-2 添加剂(100 X),并加入终浓度 0.5 ~ 2 mM 的 L-谷氨酰胺或 L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液; 
2、原代神经元细胞首次接种平板时,应先加入 25 µM(3.7 μg/ml)L-谷氨酸。有些细胞系需要加入终浓度 2% 的血清促进细胞贴壁; 
3、可加入 25 µM β-巯基乙醇以延长海马神经元的存活时间; 
注意:培养基准备完全后,请避光保存在 2 ~ 8 ℃ 的环境里,并于一周内使用完毕。

细胞培养的条件:
培养基:神经元基础培养基 
细胞类型:贴壁细胞 
培养容器和设备:培养板,培养瓶和 CO2 恒温培养箱 
培养温度:36 ~ 38 ℃ 
培养条件:CO2 含量 5 % 的湿润空气,避光。 
实验前应对细胞培养仪器进行温度和空气的设置。 以下实验方案,均以 6 孔培养板为例。 

神经细胞培养:
原代神经元细胞的培养在神经生物学和药理学中都是必不可少的。科学家钟爱使用新分离的神经元细胞,因为它们保留着良好的功能性,但是考虑到获取不便,使用商品化的大鼠原代神经元细胞更具有灵活性,能够立即使用,同时其功能性等同于新分离的神经元细胞。而特定原代神经元细胞类型的获取,非常依赖操作者优化的实验方案。 

培养板培养细胞:
1、在 48 孔培养板或者其它培养器皿上包被冷的多聚 D-赖 氨酸溶液(0.05 mg/ml)。用于原代神经元细胞培养时,包被量 0.15 ml/cm2,室温下 1 小时; 
2、移去包被液,并用无菌水冲洗两次(包被液有细胞毒性,请冲洗彻底); 
3、勿覆盖冲洗后的培养板,保证空中水分完全干燥。干燥后可立刻使用,或者可在 4 ℃ 的干燥环境中保存两周; 
4、接种细胞入培养板,每 60 ~ 150 μL神经元基础培养基和添加剂的混和培养基,接入 90 ~ 320 个/mm2 的细胞; 
5、放入培养箱培养一小时; 
6、倾斜培养板,将培养基轻轻吸出;
7、在孔中迅速加入 0.4 ml/孔 预热的神经元基础培养基和添加剂的混和培养基;
8、接种细胞后 3 ~ 4 天,首次更换培养基,以后每隔 3 天更换一次培养基;更换时,吸出一半旧培养基,加入等量新培养基。 
注意:培养成神经细胞瘤时,接种和替换的培养基中需要含 L-谷氨酰胺溶液。 

复苏: 
低温储藏复苏后的原代神经元细胞非常脆弱,请勿离心收集细胞!神经元细胞可以附着在塑料或者玻璃表面。为了最大程度复苏细胞,我们推荐在使用之前,请用培养基预冲洗所有塑料和玻璃表面。 
1、实验前请准备好多聚 D-赖氨酸溶液包被的无菌培养器皿;
2、在 37 ℃ 水浴中,迅速(< 1 分钟)溶解一小管冻存的细胞。最后一丝冰融化时,立刻从水浴中移出管子;
3、在完全培养基中冲洗移液器尖端,然后轻轻的吸取小管中溶解的细胞,并转移至预先用培养基冲洗过的 15 ml 圆锥管中;
4、用 1 ml 预热的培养基冲洗小管,然后用每秒钟 2 滴的速度滴到 15 ml 圆锥管中,每滴后轻摇混匀;
5、逐滴加入 2 ml 培养基,每滴后轻摇混匀,使管内悬液体积达到 4 ml; 
6、细胞计数; 
7、在多聚 D-赖氨酸溶液包被过的 48 孔板(或者 8 腔室盖玻片)的每个孔(或者腔室)中加入约 1 × 105 个细胞,并用培养基补充终体积至 500 μL;
8、放入培养箱培养; 
9、接种细胞后每隔 3 天更换一次培养基;更换时,吸出一半旧培养基,加入等量无 L-谷氨酰胺的新培养基。

储存/保存方法
2 ~ 8 ℃,避光,有效期12个月。
技术指标
内毒素:≤1 EU/mL
渗透压:270 ~ 340 mOsm/kg·H20
pH 值:7.0 ~ 7.4
产品用途
本产品供科学研究和生产使用,用于组织和细胞的体外培养。
基本信息
外观
红色澄清液体