在有Mg²⁺和ATP存在的条件下，T4 DNA Ligase能催化双链 DNA或RNA上相邻的5´-磷酸末端和3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化双链DNA的平末端或粘性末端之间的连接，还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻，但不能催化单链 DNA 之间的连接。
产品组成：

组成	500U	500U×10
T4  DNA Ligase (5U/uL)	500U	500U×10
5×T4 DNA Ligation Buffer	400uL	400uL×10

酶储存缓冲液：
10 mM Tris-HCl (pH 7.5) ，50mM KCl，1mM DTT， 0.1mM EDTA，50% (v/v) glycerol。
5 × T4 DNA Ligase Buffer
250 mMTris-HCl (pH 7.5)， 50mM MgCl₂，50mM DTT， 5mM ATP，连接促进剂。

纯化于携带T4 DNA ligase 基因 的E. coli 菌株。

5U/uL

连接反应体系：
1、在一个无菌0.2mL的PCR管中加入以下成分 

成分	体积
5×T4 DNA Ligase Buffer	2uL
载体（50-100ng/uL）	XuL
片段	YuL
T4 DNA Ligase （5U/uL）	1uL
灭菌水	补至10uL

用手指轻弹管底混匀各成分，离心数秒使反应混合物沉到管底。
2、反应条件
粘性末端连接：25℃反应5-10分钟。
平末端连接或者一个平端另一个为粘端的连接：25℃反应30-60分钟。
3、连接载体和片段的使用量
连接载体和片段的量一般按照摩尔比 1:3-1:10 进行，片段使用量比载体使用量大，载体和片段的使用量一般为 50-100ng 之间。
例如，3kb 的载体和 0.5kb 片段按摩尔比 1:3 的连接反应。假如使用 50ng 的 3kb 载体，那么 0.5kb 的片段需要量计算方法为：[（50ng×0.5kb）÷3kb]×(3÷1)=25ng
4、转化
连接完成后，取 5-10uL连接产物加到合适的感受态细胞中，按照感受态细胞说明书中所叙述的转化步骤进行转化。连接反应结束后不能转化时，可将连接产物置于-20℃冰箱中保存。

-20℃保存，有效期12个月。

抑制剂和热失活：
大于200mM的NaCl或KCl可以强烈抑制连接酶活性。65℃加热 10分钟或70℃加热5分钟即可失活。
单位定义：
在37℃，20分钟内交换1 nmole 的³²PPi所需要的酶量定义为一个Weiss单位。本产品酶1U(Weiss Unit)相当于200个粘性末端单位。在T4 DNA 连接酶反应缓冲液中，16℃条件下，30分钟能够使50%的经Hind III消化的λDNA 片段连接所需要的酶量为一个粘性末端单位。

质量控制：
蓝白斑分析实验表明白斑数小于2%;过量T4 DNA Ligase 混合超螺旋质粒检测实验表明无核酸酶检出；SDS-PAGE检测重组蛋白纯度大于99%。

1、化冻 5×T4 DNA Ligase Buffer 后，需要混匀后再使用。
2、T4 DNA Ligase 最适活性温度为 37℃，但是高温连接形成的连接产物的转化效率会大大降低，所以选用 25℃或 16℃等稍低的连接温度。如果连接产物不用转化且需要高的连接效果，可以在 37℃条件下进行。
3、该酶需要 Mg²⁺为激活剂，因此螯合 Mg²⁺的 EDTA 的存在会阻碍连接反应。溶解于高浓度 EDTA 缓冲液的 DNA 需要用灭菌水或 TE 缓冲液进行置换。