产品简介：

聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)原理在于聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶及 SDS-聚丙烯酰胺凝胶；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开，主要用于分离蛋白质和寡核苷酸。常规 SDS-PAGE凝胶电泳适用于分离大分子蛋白，对于小分子量的蛋白或多肽，分辨率大大降低。

Jinpan Tricine-SDS-PAGE  电泳能够较好的分离 10KD  以下的蛋白或多肽，是电泳法分离多肽的主要方法，30T 一般可以配制 30～35  块胶，具体配制的量应根据器具大小决定。电泳分离后可直接考马斯亮蓝染色、银染等。 

产品组成：

编号 名称	P0819 30T	Storage
试剂(A): 49.5%T 3%C	2ml	4℃
试剂(B): 49.5%T 6%C	60ml	4℃
试剂(C): Gel buffer	90ml	4℃
试剂(D): Glycerol	20ml	RT
试剂(E): Ammonium Persulfate	0.3g	RT
试剂(F): TEMED	2×1ml	4℃  避光
使用说明书	1 份

 

操作步骤(仅供参考)：

1、  配制 10%过硫酸铵(APS)：直接在 0.3g Ammonium Persulfate  中加入 3ml  蒸馏水，充分溶解，分装成小份储存于-20℃或 4℃。注意：一般用 1.5mlEP 管分装成 0.5-1ml每支，-20℃保存，每支使用 2-3 次即弃用。短期使用时，可保存于 4℃，1 周有效。

2、  根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照附表配制分离胶：

①   将不同体积的蒸馏水、49.5%T 6%C、Gel buffer、Glycerol  加入到离心管中充分混合。

②   加入 10%APS  和 TEMED，立即涡旋混匀 5～10s，以使溶液充分混匀。

③   在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液(1mm mini-gel，分离胶溶液加约 4ml），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层 1～3cm  的水层，使凝胶表面保持平整。

④   静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

3、  根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照附表配制夹层胶：

①   去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽量吸去。

②   将不同体积的蒸馏水、49.5%T 3%C  和 Gel buffer  加入到离心管中混合。

③   加入 10%APS  和 TEMED，立即涡旋混匀 5～10s，以使溶液充分混匀。

④   将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面(对于 1mm  的 mini-gel，夹层胶溶液加约1ml)，然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层 1～2cm  的水层，使凝胶表面保持平整。

⑤   静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

4、  根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照附表配制浓缩胶：

①   去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。

②   将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C  和 Gel buffer  加入到离心管中混合。

③   加入 10%APS  和 TEMED，立即涡旋混匀 5～10s，以使溶液充分混匀。

④   将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

⑤   静置，待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，避免破坏加样孔。进行电泳操作。

5、  电泳

将电泳槽置于 4℃或冰水浴中，外槽加入阳极缓冲液，内槽加入阴极缓冲液，30V  预电泳10 min，将处理好的样品加入点样孔， 30V  电泳 1h， 100V  电泳至溴酚蓝到达胶底部后停止电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。 

附表  Tricine-SDS-PAGE  凝胶配方表

成分	分离胶			夹层胶	浓缩胶
浓度/体积	20%/4.5ml	16.5%/4.5ml	15.5%/4.5ml	10%/2ml	10%/2ml
49.5%T 3%C	–	–	–	0.407ml	0.16ml
49.5%T 6%C	1.82ml	1.5ml	1.395ml	–	–
Gel buffer	1.5ml	1.5ml	1.5ml	0.667ml	0.667ml
Glycerol	0.48ml	0.48ml	0.48ml	–	–
蒸馏水	0.7ml	1.02ml	1.125ml	0.926ml	1.344ml
10%APS	40μl	40μl	40μl	20μl	20μl
TEMED	5μl	5μl	5μl	3μl	3μl

注意事项：

1、  过硫酸铵配制成 10%APS 溶液后应当-20℃保存，用 2~3  次，亦可 4℃保存几天。

2、  TEMED  易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切。可通过适当调节 TEMED  的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。

3、  配制聚丙烯凝胶的过程中，如果室温较低，可以置于 37℃放置，加速凝固。在液体混匀的时候应尽量避免气泡的产生。

4、  在分离胶上层加蒸馏水时要缓慢，速度不宜过快。

5、  49.5%T 3%C  和 49.5%T 6%C  为不同比例的 Acr-Bis，有轻微神经毒性，请小心操作。 

有效期：24 个月有效。