福尔根DNA染色液

产品简介：

    脱氧核糖核酸(DNA)染色方法有Feulgen法、甲基绿-派洛宁法、吖啶橙荧光法等，其中最经典的是Feulgen法, 该法是一种经典的酶组织化学法。

Jinpan Feulgen Stain 原理在于DNA经温和的弱酸(例如盐酸)水解后，嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开，并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开，在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与Schiff试剂结合，形成紫红色化合物，使细胞内含有DNA的部位呈紫红色。紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基(醌基是一个具有颜色的发色团，所以凡含有DNA的部位就呈紫红色。该水解作用不影响核糖-嘌呤结合键，因此RNA用此法处理后则分解，所以该法不适用于证明RNA。

产品组成：

编号       名称		D6610 3×50ml	Storage
试剂(A): Schiff Reagent		50ml	4℃ 避光
试剂(B): SO2水	B1: 弱酸溶液	50ml	RT
	B2: 亚硫酸盐溶液	50ml	RT
使用说明书		1份

自备材料：
1、蒸馏水、系列乙醇
2、恒温箱 

操作步骤(仅供参考)：
(一)石蜡切片染色
1、组织固定：Carnoy固定石蜡切片较好，10%福尔马林亦可，不宜采用Bouin固定液。
2、配制弱酸工作液: 按弱酸溶液:蒸馏水=1:4配制，即取1份弱酸溶液、4份蒸馏水，充分混合，即获得弱酸工作液。
3、石蜡切片脱蜡至蒸馏水。
4、入弱酸工作液，室温浸洗一下。
5、 切片入预热至60℃的弱酸工作液，孵育8min。
6、切片入室温的弱酸工作液中冲洗1min。
7、蒸馏水冲洗。
8、切片入Schiff Reagent，室温避光染色30~60min。
9、在上述染色过程中，配制SO₂水工作液。按弱酸溶液:亚硫酸盐溶液:蒸馏水=1:5:94配制，即取弱酸溶液1份、亚硫酸盐溶液5份、蒸馏水94份，充分混合，即配即用。
10、用新鲜配制的SO₂水工作液洗切片3次，每次90s。
11、蒸馏水中洗净。经系列乙醇脱水。二甲苯透明并封片。

(二)冰冻切片染色
1、冰冻切片预处理：取1份乙酸、3份无水乙醇混合即为固定液，固定10min。
2、由无水乙醇脱水–逐级下行—蒸馏水。
3、配制弱酸工作液：按弱酸溶液:蒸馏水=1:4配制，即取1份弱酸溶液、4份蒸馏水，充分混合，即获得弱酸工作液。
4、余下步骤同上述石蜡切片染色。 

染色结果：

细胞核内DNA

红紫色

 

阴性对照： 将同样切片经上述步骤， 只有步骤5改为入室温弱酸工作液，孵育15min。结果为细胞核DNA阴性。 

注意事项：

水解时间很重要，并且应使用恰当的固定时间。不同的固定液水解时间不一样。

固定液	水解时间(min)
Carnoy固定液	8min
Helly固定液	8min
Susa固定液	18min
福尔马林	8min
Zenker液	5min

 

注意Schiff Reagent的纯净程度，若变浅粉红亦可考虑使用，颜色变红则弃用。
去除切片上多余Schiff Reagent的方法以SO₂水洗为好。
应做阴性对照试验。

 

有效期： 6个月有效。