GUS染色液

产品简介：

GUS(β-Galactosidase)基因是存在于E.coli等一些细菌基因组内的编码β-葡萄糖苷酸酶的一种水解酶，该基因常作为融合标记用于植物转基因分析和调控研究中。GUS受体基因系统有表达E.coli GUS酶的稳定性和在植物内的低活性，绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。5-Bromo-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide，cyclohexylammonium salt(简称为X-Gluc或X-GlcA)分子量为521.8，CAS号为18656-96-7，是检测大肠杆菌中GUS基因的底物，可快速检测植物中GUS基因融合标记。

β-葡萄糖苷酶基因染色试剂盒(β-Galactosidase Reporter Gene Staining Kit)简称为GUS染色液，其染色原理是适宜的反应条件下，β-葡萄糖苷酶(GUS)可将X-Gluc水解成蓝色物质，该物质不溶解于转基因的细胞核组织中的靛蓝物质，具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。GUS染色液可用于生物化学活性分析、免疫分析以及组织和细胞的组织化学染色，多用于转基因植物的GUS基因表达分析。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

 

产品组成：

编号       名称	D6611 110ml	Storage
试剂(A): GUS Buffer A	50ml	RT
试剂(B): GUS Buffer B	0.2ml	4℃ 避光
试剂(C): GUS Buffer C	0.2ml	4℃ 避光
试剂(D): 2×Fixation Buffer	25ml	RT 避光
试剂(E): X-GlcA	80mg	-20℃ 避光
试剂(F): X-GlcA solvent	1ml	RT 避光
试剂(G): Deionized water	100ml	RT
使用说明书	1份

 

自备材料：
1.无水乙醇、甲醇
2.去离子水
3.小瓶或多孔板、显微镜

操作步骤(仅供参考)：

配制X- GlcA Solution：取X-GlcA solvent 229μl加入至80mg X-GlcA中或取适量上述2种物质溶解，使其浓度达到350mg/ml，轻轻Vortex混匀，即为X- GlcA Solution，分装后，-20℃避光保存。

按下列比例配制GUS染色液：

组分	体积
GUS Buffer A	2.5ml
GUS Buffer B	10μl
GUS Buffer C	10μl
Deionized water	5.5ml
甲醇	2.0ml
X-GlcA Solution	20μl
Tatal volume	～10ml

固定(固定不是必须的步骤，如果不需要固定，直接进行操作步骤4)：
1、取转基因植物组织，入3～5ml清洁小瓶或多孔板中。
2、取适量2×Fixation Buffer与去离子水等量稀释即获得1×Fixation Buffer。加入1×Fixation Buffer，使Fixation Buffer完全浸没组织。室温孵育45min，弃液。
3、配制洗涤液： 按GUS Buffer A:去离子水=1:20稀释，即为洗涤液。用配制好的洗涤液漂洗3次，每次1min。
4、加入适量GUS染色液，使GUS染色液完全浸没组织。
5、用真空泵抽取小瓶或多孔板中的气体，抽取时间应大于2min。该步骤是为了抽取植物组织内的气体，并使染色液更容易进入组织内。
6、立即盖紧瓶子或多孔板，37℃孵育24h。随着孵育时间的延长，蓝色渐渐出现，当表达量较高时，GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点。
7、用乙醇脱去样本的叶绿素，一般样本浸没于乙醇1～3h。如有必要可重复该脱色步骤，以便彻底清除叶绿素。样本保存于乙醇中，可用肉眼或普通光学显微镜下观察。

 注意事项：
1、配制好的GUS染色液可以4℃避光保存半个月。
2、X-GlcA Solution应避免反复冻融，否则染色效率会下降。
3、由于组织特异性等原因，蓝色颜色反应可能不完全一致，应注意摸索具体实验条件。

 有效期： 6个月有效。