产品简介：

Hoechst 33258 也称 bisBenzimide H 33258或HOE 33258，分子式为 C25H24N6O 3HCl，分子量为533.88，CAS Number 23491-45-4。Hoechst 33258 是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低，常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也用于普通的细胞核染色、DNA染色。

Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm，Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。Jinpan Hoechst 33258染色液是浓缩的储存液，稀释后使用，一般推荐工作浓度为1～5μg/ml，用于固定细胞或组织的细胞核染色。

产品组成：

编号 名称	D0811	Storage
Hoechst 33258染色液(1mg/ml)	1ml	-20℃避光
使用说明书	1份

自备材料：

1、荧光显微镜

2、蒸馏水

3、微量秱液器

4、PBS 或生理盐水

操作步骤(仅供参考)：

(一)固定的组织细胞染色

1、根据实验具体要求，用无菌去离子水秲释到自己所需浓度，即为Hoechst 33258染色工作液。细胞核染色时，一般推荐工作浓度为1～5μ g/ml。

2、于细胞或组织样品，固定后冲洗去除固定剂。如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33258染色，如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色。对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，少加入待染色样品3倍体积以上的Hoechst 33258染色液，充分混匀。

3、室温放置 5～8min。

4、轻轻吸除Hoechst 33258染色液。

5、用无菌的 PBS 或生理盐水清洗2～3次，每次3～5min。

6、直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。

(二)活细胞染色

1、据实验具体要求，用无菌去离子水稀释到自己所需浓度，即为Hoechst 33258染色工作液。细胞核染色时，一般推荐工作浓度为1～5μg/ml。

2、取96、24、6孔板培养细胞至合适状态，按96孔板加入100μl、24孔板加入500μl、6孔板加入1ml的比例，加入适当的Hoechst 33258染色液，染液必须充分覆盖细胞。

3、在适宜于细胞培养的条件下培养20～30min。

4、轻轻吸除Hoechst 33258染色液。

5、用无菌的 PBS 或生理盐水清洗 2～3 次，每次 3～5min。

6、进行荧光检测。

注意事项：

1、Jinpan Hoechst 33258染色液(1mg/ml)应稀释至合适的浓度后使用。

2、荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。活细胞或组织染色后宜立即观察。

3、为减缓荧光淬灭，可以使用抗荧光淬灭封片液。

4、避免反复冻融，否则容易失效。

5、Hoechst33342对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。