BlotGlyco^® 糖链纯化试剂盒

　　简便快速多糖纯化和标记的试剂盒，用于高通量和重复性的糖基化分析。

 

◆试剂盒内容

●　 BlotGlyco^® 和用于MALDI-TOF质谱标记的试剂

●　 专门设计的反应管（离心管）

●　 用于除去多余标记试剂的清洗柱

●　 样品管

●　 说明书

◆特点

可以从多重未经处理的生物样品中纯化与标记糖链

●　只需一个反应管，5小时左右即可完成纯化和标记。

●　除了一个微量恒温仪和一个小型离心机，不需要其他特殊设备。

●　可使用2AB和PA等传统的荧光标记试剂。

●　试剂盒含有的独特标记试剂（aoWR），适合高灵敏的MALDI-TOF质谱分析。

●　可用on-bead简单保护MALDI-TOF Ms检测的唾液酸。

◆原理

　　BlotGlyco^® 是化学合成的高分子颗粒，BlotGlyco^® 的高密度酰肼基团可特异性地结合多糖降解端的醛基，所以BlotGlyco^® 可从不同的生物样品中选择并全面捕获多糖。酰肼基团可与醛基稳定结合，因此洗脱后就能很容易地除去肽和其他杂质。

◆操作步骤

◆用途

药物开发研究和生物工程研究

糖链分析

●　生物制药的糖基化分析：研究开发，质量管理，工艺管理。

●　细胞糖链分析：干细胞分化引起的糖链变化研究。

●　生物标志物探索：血清等活体样本的大规模糖链分析。

●　蛋白质组学融合：电泳条带中的糖链分析。

 

◆实验案例

生物制药的糖基化分析

抗体的N型糖链：使用10μg IgG

生物标记物的探索

人血清N型糖链：使用5μL血清

BlotGlyco^® O-Glycan样品制备试剂盒.pdf

Q&A

Q：哪些样本可进行糖链分析？

A：除了纯化的糖蛋白以外，血清、血浆、细胞、组织、电泳凝胶等均可进行糖链分析。

Q：可否从样本中特定蛋白质捕获纯化的糖链？

A：需要运用免疫沉降和SDS-PAGE等分离目的蛋白质。CBB染色条带可从电泳后的凝胶可直接捕获纯化的糖链。

Q：样品量需要多大可进行糖链分析？

A：运用Bovine IgG实验，1μ水平即可进行N型糖链分析。如果是细胞，需要准备最低水平1×10⁶个。

Q：一个实验的磁珠能捕获多少糖链？

A：在麦芽庚糖实验中，已确认能捕获糖链的定量范围在2pmol～100nmol。

Q：糖链的回收率在什么水平？

A：大约在60～70%水平。已确认糖链的分子量、支化度、终端岩藻糖有无不会对回收率产生影响。但是还原末端的糖种类会对回收率产生影响。详细请咨询

Q：只能捕获特定的糖链吗？

A：本产品能捕获纯化具有还原端的全部糖链。对于捕获特定糖链的情况，需另外进行不同的分离纯化步骤。

Q：试剂盒中含有糖链切除用酶吗？

A：不含有糖链切除用酶。请客户自行准备PNGaseF等酶。操作说明手册有记载推荐产品。

Q：试剂盒中含有标识用试剂吗？

A：MALDI-TOF MS用标识试剂与试剂盒试剂捆绑。试剂盒中不含有PA和2AB等荧光标识试剂，需客户自备。操作说明手册有记载推荐产品。

Q：可回收未标识的糖链吗？

A：可以。使用本产品的客户可者提供参考操作手册，详情请咨询。

Q：本产品能捕捉纯化糖蛋白和糖肽吗？糖链结合位置可识别吗？

A：因为本试剂盒使用方法不能纯化糖蛋白和糖肽，所以糖链结合位置识别困难。相关技术正在开发当中，有兴趣者请咨询。

Q：O型糖链和糖脂糖链、蛋白多糖等也可进行糖链分析吗？

A：已有各种广泛的应用。详情请咨询。

Q：BlotGlyco^® 有效期？

A：生产日期起一年有效。