线粒体柠檬酸含量测试定试剂盒 微量法BC2175

产品名称：线粒体柠檬酸含量测试定试剂盒 微量法

产品型号：BC2175

产品特点：线粒体柠檬酸含量测试定试剂盒 微量法
品牌：Jinpan | 货号：BC2175
检测方法 : 微量法
规格：100管/96样

BC2175线粒体柠檬酸含量测试定试剂盒 微量法的详细资料：

        线粒体柠檬酸含量测试定试剂盒 微量法

测定意义：CA是线粒体三羧酸循环的*个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。

测定原理：CA在柠檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，α-酮酸进一步与苯肼反应，生成相应的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰，该波长下吸光度的变化程度可反映出CA的含量。

需要的仪器，耗材:可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板、研钵、蒸馏水。 

          线粒体柠檬酸含量测试定试剂盒 微量法

试剂组成和配制：酸性提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。碱性提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 6mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体 2mL×1 瓶，4℃保存。试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 6mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存；标准液：液体 1mL×1 支，10μmol/mL 柠檬酸标准液，4℃保存。

线粒体中柠檬酸提取：称 0.05~0.1g 样品（建议称 0.1g 样本），加入 0.5mL 酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃ 离心 5min；取上清另一 EP 管中，11000g/min 4℃离心 10min，弃上清（取 300μL 该上清液和 300μL 碱性提取液中和后可用于细胞质 CA 含量测定）；沉淀即线粒体，向沉淀中加入 0.5mL 酸性提取液，充分悬浮溶解，超声波破碎（功率 20％，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），取此溶液 300μL 和 300μL 碱性提取液中和，混匀，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。测定步骤： 1、分光光度计或酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 330nm，蒸馏水调零。 2、试剂一、二和三 37℃预热 10min。 3、样本测定：空白管和标准管只需要各做一个。试剂名称(μL) 空白管 标准管 测定管试剂一 60 60 60 蒸馏水 60 标准液 60 样本 60 试剂二 20 20 20 试剂三 60 60 60 充分混匀，330nm 立即测定初始吸光值 A1 和 37℃孵育 30min 后的吸光值 A2，ΔA=A2 –A1。柠檬酸含量计算：（1）按蛋白浓度计算柠檬酸含量(μmol/mg prot)=[C 标准管×(ΔA 测定管－ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管－ΔA 空白管) ×V 样]÷（V 样÷Cpr）=10×(ΔA 测定管－ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管－ΔA 空白管)÷Cpr 蛋白质含量需要另外测定。（2）按样本鲜重计算柠檬酸含量(μ mol/g鲜重)=[C标准管×(ΔA测定管－ΔA空白管)÷(ΔA标准管－ΔA空白管) ×V 样]÷（W×V 样÷V 样总）=10×(ΔA 测定管－ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管－ΔA 空白管)÷W C 标准管：标准液浓度，10μmol/mL； V 样：加入反应体系中样本体积：0.06mL；V 样总：加入提取液体积：1mL；Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。注意：检测限为 10nmol/mg prot 或 1μmol/g 鲜重。

 相关文献：

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影响因子:5.959 PMID:30850587