ATP含量检测试剂盒BC0300
产品名称：ATP含量检测试剂盒
产品型号：BC0300
产品特点：ATP含量检测试剂盒测定意义：ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。
BC0300ATP含量检测试剂盒的详细资料：
产品名称:：ATP含量检测试剂盒
产品英文名：ATP Content Assay Kit
产品货号：BC0300 产地：北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼
产品规格：100管/48样 产品商标：Jinpan
保存与运输：4℃保存或-20℃保存； 参考价格：1400
库存状态：现货
关键字：ATP含量检测试剂盒|ATP检测试剂盒|试剂盒|
简要介绍：
ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。
测定ATP 含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。肌酸激酶催化肌酸和ATP 反应生成磷酸肌酸，可在700nm 下用磷钼酸比色法检测磷酸肌酸含量，以此反应ATP 含量。
产品详细描述
产品内容：
| 组分 | 规格 | 保存 | |
| 试剂一 | 底物液Ⅰ | 粉剂×1瓶 | 室温保存 |
| 底物液Ⅰ配制：用时加10mL煮沸双蒸水溶解，并沸水浴使溶解*；临用前观察如有结晶，可沸水浴溶解后置于37℃保存待测。 | |||
| 试剂二 | 底物液Ⅱ | 20mL×1瓶 | 4℃保存 |
| 试剂三 | 促进剂 | 粉剂×2 支 | -20℃保存 |
| 稀释液760μL×2瓶 | 4℃保存 | ||
| 试剂三应用液（促进剂）配制：临用前取1支试剂三稀释液加入1支试剂三粉剂中，充分溶解备用。 | |||
| 试剂四 | 沉淀剂 | 液体5.5 mL×1瓶 | 4℃保存 |
| 试剂五 | 显色剂 | 甲液7 mL×4瓶 | 4℃保存 |
| 乙液6mL×4瓶 | 4℃保存 | ||
| 显色应用液的配制：用时取一瓶显色剂甲液加入一瓶显色剂乙液中，充分混匀4℃待用，现用现配。 | |||
| 试剂六 | 终止剂 | 50 mL×1瓶 | 室温保存 |
| 试剂七 | ATP标准品 | 粉剂×2 支 | 4℃保存 |
| 5mmol/L ATP标准品贮备液配制：用时加双蒸水定容1mL，制备5mmol/L ATP标准品贮备液。 | |||
| 1mmol/L ATP标准品应用液配制：将标准品贮备液与双蒸水1:4稀释，即5倍稀释。 | |||
产品说明：
三磷酸腺苷（adenosine 5'-triphosphate，ATP）是生物体内能量转换基本的载体, 其含量的变化直接关系到各器官的能量代谢。ATP作为重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP水平的改变，会影响许多细胞的功能。通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下，ATP水平会下降，而高葡萄糖刺激等对于一些细胞可以上调细胞内ATP水平。通常ATP水平的下降表明线粒体的功能受损或下降，在细胞凋亡时ATP水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生状态。ATP含量测定试剂盒可以用于检测红细胞或组织内的ATP水平。
自备仪器和用品：
分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、台式离心机、研钵和蒸馏水。
操作步骤：
- 样本前处理：
- 红细胞：抗凝全血取下层积压红细胞，一般按1:4的体积比加双蒸水进行稀释，再混匀使溶血*，制备成溶血液。将制好的溶血液加入玻璃试管中沸水加热煮10分钟，取出混匀抽提1分钟，4000转/分钟，离心10分钟，取上清液待测。
- 组织样本：准确称取组织重，按质量（g）：体积(mL)为1：9的比例加入9倍体积的沸双蒸水，制成10%的匀浆液，再置于沸水中煮10min，取出混匀抽提1min，3500转/分钟，离心10min，取上清液待测。
- 培养细胞：先离心处理将细胞和培养上清分离，弃上清，得到下层沉淀细胞（一般细胞数量达到106 个），将收集好的细胞加入300-500μL的热双蒸水，置于热水浴（90-100℃）中匀浆破碎后，将细胞悬液于沸水浴中加热10min，取出混匀抽提1min（涡旋混匀），即可用于测定。（如果存在大块细胞碎片，需离心后取上清测定）
二、操作步骤
| 试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
| 样本 | 30 | 30 | ||
| 1mmol/L标准液 | 30 | 30 | ||
| 试剂一 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 试剂二 | 200 | 200 | 200 | 200 |
| 试剂三 | 30 | 30 | ||
| 蒸馏水 | 30 | 30 | ||
| 充分混匀，37℃水浴30min | ||||
| 试剂四 | 50 | 50 | 50 | 50 |
| 充分混匀，4000rpm离心5min，取上清液300μL 测定 | ||||
| 样本上清液 | 300 | 300 | 300 | 300 |
| 试剂五 | 500 | 500 | 500 | 500 |
| 混匀，室温静置2min | ||||
| 试剂六 | 500 | 500 | 500 | 500 |
混匀，室温静置5min，波长636nm，光径0.5cm，双蒸水调零，测定各管吸光值。
注意：在比色前比色皿用自来水洗10次，再用蒸馏水洗4-5次，以免磷污染。
如果样本量大，建议将试剂混合后再按照该表操作
1混合试剂配制：
工作液A：按试剂一：试剂二：试剂三=100:200:30的比例配制，现用现配，按需配制。
工作液B：按试剂一：试剂二=100:200的比例配制，现用现配，按需配制。
2、试剂配好后按下表操作：
| 试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
| 样本 | 30 | 30 | ||
| 1mmol/L标准液 | 30 | 30 | ||
| 工作液A | 330 | 330 | ||
| 工作液B | 300 | 300 | ||
| 蒸馏水 | 30 | 30 | ||
| 充分混匀，37℃水浴30min | ||||
| 试剂四 | 50 | 50 | 50 | 50 |
| 充分混匀，4000rpm离心5min，取上清液300μL 测定 | ||||
| 样本上清液 | 300 | 300 | 300 | 300 |
| 试剂五 | 500 | 500 | 500 | 500 |
| 混匀，室温静置2min | ||||
| 试剂六 | 500 | 500 | 500 | 500 |
混匀，室温静置5min，波长636nm，光径0.5cm，双蒸水调零，测定各管吸光值。
注意：在比色前比色皿用自来水洗10次，再用蒸馏水洗4-5次，以免磷污染。
ATP 含量计算：
- 红细胞中ATP 含量计算
ATP 含量(μmol/gHb)=[ (A 测定管–A 对照管)÷(A 标准管–A 空白)] ×标准品浓度（1×103μmol/L）×样本测定前稀释倍数÷血红蛋白浓度（gHb/L )
- 组织、细胞中ATP 含量计算
- ATP 含量(μmol/gprot)=[ (A 测定管–A 对照管)÷(A 标准管–A 空白)] ×标准品浓度（1×103μmol/L）×样本测定前稀释倍数÷待测样本蛋白浓度（gprot/L )
注意：
1.要求不能有任何磷污染，建议用一次性塑料试管。
2.显色应用液配好后，不可放置太久，一般可保存5天，现配现用。
3.组织匀浆宜用2%-5%浓度的匀浆上清，若样本浓度过高，则底色过深（对照管OD过高），需稀释测定，一般通过预实验将对照OD值控制在1.0以下。
相关文献：
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《AMPK Inhibition Suppresses the Malignant Phenotype of Pancreatic Cancer Cells in Part by Attenuating Aerobic Glycolysis》 作者:Mingyue Hu1, Xiangxu Chen1, Li Ma1, Yu Ma1, Yuan Li1, Huihui Song1, Jiajia Xu1, Lingna Zhou1, Xiaoxue Li1, Yuhui Jiang1, Bo Kong2,3, Peilin Huang 期刊:JOURNAL OF CANCER 影响因子:3.182 PMID:31205544