脯氨酸含量测定试剂盒

产品名称：脯氨酸含量测定试剂盒

产品型号：

产品特点：脯氨酸含量测定试剂盒
Pro 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内Pro 含量显著增加。Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。

脯氨酸含量测定试剂盒的详细资料：

脯氨酸含量测定试剂盒说明书
可见分光光度法 ：BC0290 ：50T/48S
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：4℃保存。（自备）
试剂二：液体45 mL×1瓶， 4℃保存。
试剂三：4℃保存。（自备）
标准品：脯氨酸 10mg，4℃保存。
脯氨酸(Pro)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内Pro含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。
用磺基水杨酸（SA）提取Pro，加热处理后，Pro与酸性茚三酮溶液反应生成红色；加甲苯萃取后，在520nm测定吸光度。
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、冰乙酸、甲苯、研钵、冰和蒸馏水。
一、脯氨酸含量测定试剂盒样品测定的准备：
1、细胞、细菌或组织样品的制备 ：
细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清；按照每100万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次），之后置沸水浴振荡提取10min；10000g，常温离心10min，取上清，冷却后待测。
组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；之后置沸水浴振荡提取10min，10000g，常温离心10min，取上清，冷却后待测。
2、血清（浆）样品：取100μL血清（浆）加入1mL提取液，充分混匀，之后置沸水浴振荡提取10分钟，10000g，常温离心10分钟，取上清，冷却后待测。
3、标准品的处理：称取1mg，将标准品稀释为15、10、8、6、4、2、1、0 μg/ml。
二、测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长520nm，蒸馏水调零。
2、取0.5mL上清液（或稀释后的标准品）+0.5mL试剂一+0.5mL试剂二于有盖试管中，置沸水浴中保温30min（盖紧，防止水分散失），每10min振荡一次。
3、待冷却后，在试管中加入1mL试剂三，振荡30s，静置片刻，使色素转试剂三；吸取0.8mL-1mL上层溶液于1mL玻璃比色皿中，用试剂三调零，于520nm波长处比色，记录吸光值。
4、根据标准品吸光值和浓度，建立标准曲线。
三、Pro含量计算：
1、通过标准曲线计算样品脯氨酸含量(y为脯氨酸含量，μg/mL；x为OD值)
2、按照细菌、细胞个数或者组织鲜重计算，先根据标准曲线求得y值：
细胞或细菌中脯氨酸含量(μg/104 cell)= y÷细胞浓度(104 cell/mL)
Pro含量(μg/g mass) =y÷样本鲜重(g/mL)
3、血清（浆）中脯氨酸含量，先根据标准曲线求得y值：
Pro含量[μg/mL血清（浆）] = y÷0.1mL血清（浆）/mL 提取液中含有蛋白沉淀剂，提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。