SYBR Green I核酸染料(PCR级,10000X)SR4110

SYBR Green I核酸染料(PCR级,10000X)SR4110

产品名称:SYBR Green I核酸染料(PCR级,10000X)

产品型号:SR4110

产品特点:PCR试剂 SYBR Green I核酸染料(PCR级,10000X)
货号:SR4110
规格:50/100ul
保存:-20℃避光保存,有效期少一年。

SR4110SYBR Green I核酸染料(PCR级,10000X)的详细资料:

PCR试剂 SYBR Green I核酸染料(PCR级,10000X)
货号:SR4110
规格:50/100ul
保存:-20℃避光保存,有效期少一年。

产品说明 :
    SYBR Green I 染料是一种直接与双链 DNA (dsDNA) 结合的荧光染料,是荧光定量 PCR 常用的 DNA结合染料。在定量 PCR 中,SYBR Green I 可与双链 DNA(dsDNA)非特异性结合后发出荧光,则可以通过检测反应体系中的 SYBR Green I 荧光强度,达到检测 PCR 产物扩增量的目的。游离状态下,SYBR Green I 发出微弱的荧光,一旦与 dsDNA 结合,其荧光增加 1000 倍,一个反应发出的全部荧光信号与出现的 dsDNA 量成比例,且会随扩增产物的增加而增加;所以通过检测 PCR 反应液中的荧光信号强度,可以对目的基因进行准确定量,同时还可以测定扩增的目的 DNA 段的熔解温度。

使用说明 :
    使用时,配置PCR反应混合液, 将10000×SYBR Green I浓缩液加入到PCR反应体系, 使终浓度为0.5× (0.2×到 1×之间调整) 。以上操作建议在冰上进行。
注: ① 反应液配制方法和 PCR 扩增条件请参照 DNA 聚合酶使用说明。
     ② Realtime PCR 扩增仪的使用方法,请参照各仪器说明书。

注意事项 :
    使用浓度对荧光 PCR 结果的影响
    SYBR Green I 的使用浓度是保证荧光定量 PCR 实验成功非常关键的因素。如果 SYBR Green I 的浓度过低会使荧光信号的变化降低,这就意味着低拷贝的样品可能无法检出;而在高浓度时,将会抑制 PCR 反应,降低PCR 反应效率。所以一般在使用 SYBR Green I 时应根据实际情况优化使用浓度,反应的终浓度为 0.2×到 1×之间。
    镁离子浓度的影响
    提高镁离子浓度可以降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。 我们建议在用SYBR Green I进行荧光PCR反应时,镁离子浓度比无 SYBR Green I 的普通 PCR 反应高出 0.5~3mM。

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 SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料,适用于各种电泳分析,操作简单:无须脱色或冲洗。少可检出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍,用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强,背景信号低。可适用于多种电泳分析。
用QPCR来做miRNA的扩增其实是一件比较难的事,因为miRNA是只有18-23个碱基的单链RNA,普通的PCR扩增方法是无法直接用的,所以目前有两种主流的解决思路:
方法1、设计颈环引物,反转录得到cDNA,然后结合探针的方法在PCR扩增时进行荧光定量,这种方法以ABI公司为代表,优点是扩增特异性好,缺点是成本太高,所以ABI的miRNA技术服务是很贵的 
方法2、通过在miRNA 3‘端进行加A,以延长片段的长度,然后通过特殊设计的RT引物反转录得到cDNA,后用SYBR为荧光染料进行定量PCR,此法优点是价格便宜,操作简单,灵敏度高,尤其对低丰度miRNA的检测要明显优于探针法;缺点是特异性稍差,不过近研究发现miRNA 的3’端有多样性。
总的来说方法2要好于方法1 ,因为一旦miRNA 3‘端增加或减少一两个碱基,颈环引物则无法使用,也就是说方法1只能检测某种miRNA的一种序列。

PCR试剂 SYBR Green I核酸染料(PCR级,10000X)

 参考文献:
《Regulation of insulin resistance by targeting the insulin‐like growth factor 1 receptor with microRNA‐122‐5p in hepatic cells》 作者:Li Dong,Xiaoyu Hou,Fengsui Liu,Hong Tao,Yunjia Zhang,Hang Zhao,Guangyao Song 期刊:Cell Biology International 影响因子:2.127 PMID:30958584
《Collagen facilitates the colorectal cancer stemness and metastasis through an integrin/PI3K/AKT/Snail signaling pathway》 作者:Xiangbin Wu,Jianhui Cai,Zhigui Zuo,Jinlei Li 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影响因子:3.743 PMID:30913493
《MMP-9 secreted by tumor associated macrophages promoted gastric cancer metastasis through a PI3K/AKT/Snail pathway》 作者:Liu Lin,Yu Ye,Xiumei Zhu 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影响因子:3.743 PMID:31202170