PCR试剂 Pfu DNA PolymerasePC1300
产品名称：PCR试剂 Pfu DNA Polymerase
产品型号：PC1300
产品特点：PCR试剂 Pfu DNA Polymerase货号：PC1300 规格 ：500U/1000U浓度 ：5U/ul保存 ：-20℃保存, 有效期少一年。
PC1300PCR试剂 Pfu DNA Polymerase的详细资料：
PCR试剂 Pfu DNA Polymerase
货号：PC1300
规格 ：500U/1000U
浓度 ：5U/ul
保存 ：-20℃保存, 有效期少一年。
产品简介 ：
Pfu DNA Ploymerase 是从克隆有 Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase 基因的大肠杆菌中表达并经过柱纯化分离出来的重组蛋白，其分子量为 90kD。由于 Pfu 酶具有 3’→5’核酸外切酶活性，它能纠正 DNA 扩增过程中产生的错配，而传统的 Taq 酶却不能，其它耐热 DNA Polymerase 如 Vent、Deep Vent、Tli、UITma 等虽具有校正功能， 但 Pfu 酶是目前已发现的所有耐热 DNA Polymerase 中出错率低的。 Pfu 酶无 5’→3’核酸外切酶活性，PCR 反应中的延伸速度一般为 0.5-1kb/min，比 Taq 酶要低。Pfu 酶比 Taq 酶热稳定性更好，95 1 ℃ 小时仍保持90%以上的活性，对于 GC 含量很高的模板，变性温度可以提高到 98℃而不影响其活性。Pfu 酶的 PCR 产物为平末端，可加 A 处理再与 T-载体连接或使用平末端克隆载体。
活性定义 ：
1 单位(U) Pfu DNA Polymerase 活力定义为在 74℃，30 分钟内，以活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物，将 10 nmol 脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
质量控制 ：
SDS-PAGE 检测 Pfu DNA Polymerase 纯度大于 99%； 经检测无外源核酸酶活性； PCR 方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增人类基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。
酶贮存缓冲液 ：
50mM Tris-HCl (pH 8.2); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% glycerol；其他成份。
适用范围 ：
用于 DNA 的高保真扩增，如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变的分析（SNP）和末端补平等。
建议 PCR 体系（以 50µl 反应体系为例）
Template <0.5µg
上游引物（10µM） 1µl
下游引物（10µM） 1µl
10×Buffer（含 Mg 2+ ） 5µl
dNTP（各 2.5mM） 4µl
Pfu DNA Polymerase 0.5-1µl
ddH2O up to 50µl
注意事项 ：
1、PCR 反应体系加样时，后一步加入 Pfu DNA Ploymerase，整个过程宜在冰上操作。
2、取 Pfu DNA Ploymerase 做 PCR 反应时，请用高压灭菌处理过的吸头。
3、10×Pfu Buffer 中含 20 mM Mg 2+ ，如 PCR 反应需要较高 Mg 2+ 浓度，请另行加入。
4、 用Pfu酶扩增时， 引物的纯度要求较高， 引物长度大于18个碱基， Tm值在55-80℃之间， 引物浓度在0.1-0.5uM之间，比 Taq 酶略高。
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