谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）活性检测试剂盒BC1190

产品名称：谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）活性检测试剂盒

产品型号：BC1190

产品特点：谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）活性检测试剂盒
氧化型谷胱甘肽（GSSG）是谷胱甘肽（GSH）的氧化形式，又称为二硫代谷胱甘肽，是两分子的谷胱甘肽氧化而成。GSSG会被谷胱甘肽还原酶还原成GSH，因此机体中大多数是以还原型形式存在。

BC1190谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）活性检测试剂盒的详细资料：

产品名称：谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性检测试剂盒

产品英文名：Glutathione Peroxidase (GPX) Assay Kit

产品货号：BC1190              产地：北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格：50管/48样             产品商标：Jinpan
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：1600
库存状态：现货                          
关键字：谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒|活性检测试剂盒|GPX含量检测|试剂盒|
简要介绍：
氧化型谷胱甘肽（GSSG）是谷胱甘肽（GSH）的氧化形式，又称为二硫代谷胱甘肽，是两分子的谷胱甘肽氧化而成。GSSG会被谷胱甘肽还原酶还原成GSH，因此机体中大多数是以还原型形式存在。测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。本试剂盒利用谷胱甘肽能和5，5’-二硫代-双-（2-硝基ben甲酸）（5，5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基ben甲酸，2-硝基-5-巯基ben甲酸在波长412nm处具有大光吸收的特点，通过2-乙烯吡dian抑制样品中原有的还原型谷胱甘肽，然后利用谷胱甘肽还原酶将GSSG还原为GSH，借此测定氧化型谷胱甘肽的含量。
 

产品详细描述
产品内容：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体×1支，-20℃保存。
 试剂四：液体×1瓶，4℃保存。
    工作液配制：临用前，在试剂二中加入试剂一40 mL，充分震荡溶解后加入全部试剂三，混匀。（当天用完）
产品说明：
谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px）是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。
GSH-Px催化H₂O₂氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP⁺；NADPH在340 nm有特征吸收

谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性检测试剂盒

自备仪器和用品：
紫外–可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取0.1g 组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测(如上清不清澈，再离心3min)。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量10⁴个：试剂一体积（ml）500~1000:1 的比例，建议500 万细胞加入1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 s，间隔7s，总时间3min）然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置冰上待测(如上清不清澈，再离心3min)。
3. 血清等液体：直接测定。

二、GSH-Px测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 混合试剂在25℃或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min以上。
3. 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸馏水、800μL预热的工作液，100μL试剂四，迅速混匀后于340nm处测定第10 s处的吸光值，37℃水浴3min后迅速拿出测量吸光度，分别记为A空1和A空2。计算△A空=A空1-A空2。（空白管只需做1~2个）
4. 测定管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、800μL预热的工作液，100μL试剂四，迅速混匀后于340nm处测定第10 s处的吸光值，37℃水浴3min后迅速拿出测量吸光度，分别记为A测1和A测2。计算△A测=A测1-A测2。
三、GSH-Px活性计算：
（1）按蛋白浓度计算
GSH-Px活力单位定义：一定温度下，每mg蛋白在反应体系中每分钟催化1nmol NADPH氧化定义为一个酶活力单位。
GSH-Px (U/mg prot) =[ (△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×10⁶] ÷[Cpr×V样]÷T
             =536×(△A测定管–△A空白管)÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
GSH-Px活力单位定义：一定温度中，每g样品在反应体系中每分钟催化1μmol NADPH氧化定义为一个酶活力单位。
GSH-Px (U/g 鲜重)=[ (△A测定管–△A空白管)÷(ε×d)×V反总×10⁶] ÷(V样÷V样总×W)÷T
            =536×(△A测定管–△A空白管)÷W
(3) 按细胞数量计算
GSH-Px 活力单位定义：一定温度中，每10⁴个细胞每分钟催化1μmol NADPH 氧化定义为一个酶活力单位。
GSH-Px (U/10⁴ cell)=[(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109]÷（细胞数量×V 样÷V样总）÷T
=536×(△A 测定管–△A 空白管)÷细胞数量
(4) 按液体体积计算
GSH-Px 活力单位定义：一定温度中，每毫升液体每分钟催化1μmol NADPH 氧化定义为一个酶活力单位。
GSH-Px (U/ml)=[(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×109]÷V 样÷T
=536×(△A 测定管–△A 空白管)
△A空白管=A空1-A空2；△A测定管=A测1-A测2。
ε：NADPH摩尔消光系数6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V反总：反应体系总体积，0.001 L；10⁶：1 mol=1×10⁶μmol；Cpr：上清液蛋白浓度（mg/mL）；V样：加入反应体系中上清液体积，100μL =0.1 mL；T：反应时间，3 min；W ：样品质量，g。
注意事项：
（1）样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力；
（2）混合试剂和底物液须临用前配制，配完后置于冰上；
（3）测定过程操作须迅速；
（4）细胞中GSH-Px活性测定时，细胞数目须在300万-500万之间，细胞中GSH-Px的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞。

相关文献：
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《Antioxidant activity of whole grain Qingke (Tibetan Hordeum vulgare L.) toward oxidative stress in d-galactose induced mouse model》 作者:Xuejuan Xia,Yuxiao,Xing,Guannan Li,Jinsong Wu,Jianquan Kan 期刊:Journal of Functional Foods 影响因子:3.197 PMID:
《Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development》 作者:Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen, Huihui Du, Linping Wang,Dongqin Guo & Tingzhang Hu 期刊:Toxicological & Environmental Chemistry 影响因子:3.547 PMID:28189720
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