牛脾脏淋巴细胞分离液试剂盒P6240
产品名称：牛脾脏淋巴细胞分离液试剂盒
产品型号：P6240
产品特点：牛脾脏淋巴细胞分离液试剂盒货号：P6240规格：200ml/KIT保存 ：室温避光储存，有效期少 2 年。
P6240牛脾脏淋巴细胞分离液试剂盒的详细资料：
牛脾脏淋巴细胞分离液试剂盒
货号 ：P6240
规格 ：200ml
保存 ：室温避光储存，有效期少 2 年。
试剂盒内容 ：
全血及组织稀释液 200ml
细胞洗涤液 200ml
试剂C 200ml
试剂F 200ml
说明书 1 份
脾脏组织单细胞悬液的制备方法
注 ：A ．全过程及所需试剂要求无菌环境 。
B ．本试剂盒中不包含胶原酶，若采用酶消化法制备单细胞悬液 ， 请客户根据各实验室要求另购不同类型胶原酶 。
1. 剪碎法：将组织块放入平皿后，加入少量F液及20%胎牛血清；用眼科剪将组织剪匀浆状，加入5mlF液及20%胎牛血清；用吸管吸取组织匀浆，用100目不锈钢滤网(另购)过滤到试管内；离心沉淀1500转/分×3min，再用细胞洗涤液清洗3次，每次以500rpm短时低速离心除去细胞碎片，以200目不锈钢滤网（另购）过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×10 7 个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×10 8 -1×10 9 个/ml的单细胞悬液备用。
2. 匀浆器法：用眼科剪将组织剪成小块；放入70ml组织研磨器内，加入2mlF液及20%胎牛血清；缓慢转动研棒，研磨匀浆；用5mlF液及20%胎牛血清冲洗研器；收集细胞悬液，经200目不锈钢滤网（另购）过滤；
离心沉淀800rpm×2min ，再用细胞洗涤液洗3次，离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×10 7个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×10 8 -1×10 9 个/ml的单细胞悬液备用。
3. 酶消化法：
A．用F液将胶原酶稀释，终浓度为400 U/ml，于冰浴备用。
B．取一适当大小培养皿进行操作：用镊子夹碎动物脾脏，加入稀释后的胶原酶，37℃消化20分钟。
C．以100或200目不锈钢滤网（另购）过滤，离心沉淀800prm×2min ，再用细胞洗涤液洗3次，离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5×10 7 个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×10 8 -1×10 9 个/ml的单细胞悬液备用。
细胞计数方法:
细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板）进行。既可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。
不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。
计数与计算过程
1）在细胞计数板中央放置计数的盖玻片。
2）用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液，盖玻片被液体充满为止。
3）置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，对于细胞团按单个细胞计数。
4）按下式计数细胞悬液的密度： 细胞密度＝（4个大格细胞总数/4）×10 4 个/ml×稀释倍数公式中乘以10 4 因为计数板中每一个大格的体积为：
1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）＝0.1mm 3 而 1ml＝1000mm 3
细胞计数要点：
A．进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于10 4 个/ml，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中；显微镜下计数时，遇到2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如果细胞团>10％，说明细胞分散不充分; 或细胞数<200个/10mm 2 或>500个/10 mm 2 时，说明稀释不当，需重新制备细胞悬液。
B．要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。
C． 取样计数前， 应充分混匀细胞悬液， 尤其是多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀， 以求计数准确；
D．数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照一个细胞计算。如果细胞压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计左线，不计右线。
E． 操作时，注意盖玻片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。
? 脾脏淋巴细胞分离方法
1．取1ml脾脏细胞悬液（细胞浓度为2×10 8 -1×10 9 个/ml）小心叠加在C 液之液面上（比例为1：1），20℃±2℃，400g（约1500 转/分），离心20 分钟（半径15cm 水平转子）。
2. 此时离心管中由上下细胞分四层。*层;为稀释液层。第二层；为环状乳白色淋巴细胞层。第三层；为透明分离液层。第四层；为红细胞层。收集第二层细胞放入含细胞洗涤液4-5 毫升的试管中，充分混匀后，以500g（约1800 转/分）离心20 分钟。沉淀经反复洗涤2 次即得所需淋巴细胞。
注： 提取率约为80%。
分离图例：
三 、 注意事项
A． 本分离液是敏光型的，在运输和贮藏过程中应在18℃-25℃避光保存，启封后置4℃保存避免微生物污染。另外，本品为真空包装，未启封前置于10℃ 以下易出现白色结晶，影响分离效果。
B． 待分离的骨髓要求新鲜，避免冷冻和冷藏。分离液和所分离样本一定在20℃水浴箱中复温20 分钟保证分离液和所分离样本温度在20℃±2℃时分离效果好，且所有操作过程一定要在无菌条件下进行。
C． 由于各品牌离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响分离效果，用户可以调节离心转数，调节离心的时间，摸索佳的分离条件（具体分离条件各实验室自定）。
D． 好使用无静电反应的离心管，推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。
四 、 产品性能指标
pH 7.0-7.5
渗透压 280-340mOsmol/kg
内毒素 ≤0.5EU/ml
无菌 直接接种培养14 天后培养基澄清
澄明度及不溶性颗粒物 每50ml 溶液中含10µm 以上的不溶性微粒20 粒以下，
含25µm 以上的不溶性微粒5 粒以下
五 、 贮藏及保存期限
18℃-25℃避光保存，有效期两年。启封后置4℃保存，有效期一周。
注：若保证无微生物污染，启封后可置4℃长期保存。但应注意保存温度较低时本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
牛脾脏淋巴细胞分离液试剂盒订购说明：
1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。
2、部分非常用产品，需提前1－2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日新价格为准。
4、每日订单截止时间为16点整，部分城市可到17点整，因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后，将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。
运输说明：
1、极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入金畔生物的箱子，然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
2、低温产品：低温产品运输过程中加装金畔生物冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入金畔生物的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
3、常温产品：常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货，准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。