谷胱甘肽S-转移酶（GST）活性检测试剂盒BC0355
产品名称：谷胱甘肽S-转移酶（GST）活性检测试剂盒
产品型号：BC0355
产品特点：谷胱甘肽S-转移酶（GST）活性检测试剂盒GST是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。GST是体内解毒酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与GSH的巯基共价结合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。因此，GST在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。
BC0355谷胱甘肽S-转移酶（GST）活性检测试剂盒的详细资料：
谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性检测试剂盒
操作步骤：
一、 粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10 4个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等体积：直接测定
二、 测定：
1. 分光光度计预热30 min以上，调节波长到340 nm，用蒸馏水调零。
2. 试剂三放在25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）保温。
3. 空白管：取微量石英比色皿或96孔板，加入20μL试剂一，180μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀后于340nm测定吸光度变化，记录10 s和310 s吸光度为A1和A2。
4. 测定管：取微量石英比色皿或96孔板，加入20μL上清液，180μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀后于340nm测定吸光度变化，记录10 s和310 s吸光度为A3和A4。
谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性检测试剂盒
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 (1) 按蛋白浓度计算活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化1μmol/L CDNB与GSH结合为一个酶活单位。 GST（U/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反总÷(Cpr×V样)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr (2) 按样本质量计算 活性单位定义：在 25℃或者 37℃中，每克样品每分钟催化 1μmol/L CDNB 与 GSH 结合为一个酶活单位。 GST（U/g）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W (3) 按细胞数量计算活性单位定义：在25℃或者37℃中，每10 4个细胞每分钟催化1μmol/L CDNB与GSH结合为一个酶活单位。 GST（U/10 4 cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷细胞数量 (4) 按液体体积计算活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫升液体每分钟催化1μmol/L CDNB与GSH结合为一个酶活单位。 GST（U/ml）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反总÷V样÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ε：产物摩尔消光系数，9.6×10 3 L/mol /cm；d：比色皿光径，1cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V反总：反应体系总体积，220μL=2.2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议选用本公司生产的BCA 蛋白质浓度测定试剂盒；W ：样品质量；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；V样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间（min），5min。 b. 使用96孔板测定的计算公式如下 1) 按蛋白浓度计算活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化1μmol/L CDNB与GSH结合为一个酶活单位。 GST（U/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×106×V反总÷(Cpr×V样)÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr 2) 按样本质量计算活性单位定义：在25℃或者37℃中，每克样品每分钟催化1μmol/L CDNB与GSH结合为一个酶活单位。 GST（U/g）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×106×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W 3) 按细胞数量计算活性单位定义：在25℃或者37℃中，每104个细胞每分钟催化1μmol/L CDNB与GSH结合为一个酶活单位。 GST（U/10 4 cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷细胞数量 4) 按液体体积计算活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫升液体每分钟催化1μmol/L CDNB与GSH结合为一个酶活单位。 GST（U/ml）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反总÷V样÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ε：产物摩尔消光系数，9.6×10 3 L/mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V反总：反应体系总体积，220μL=2.2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议选用本公司生产的BCA 蛋白质浓度测定试剂盒；W ：样品质量；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；V样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间（min），5min。
GST是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。GST是体内解毒酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与GSH的巯基共价结合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。因此，GST在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外，因为GST具有GSH-Px活性，亦称为non-Se GSH-Px，具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。注意，GST催化的反应减少GSH含量，但是不增加GSSG含量。 GST催化GSH与CDNB结合，其结合产物的光吸收峰波长为340nm；通过测定340nm波长处吸光度上升速率，即可计算出GST活性。
相关文献：
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