丙酮酸激酶（PK）活性检测试剂盒BC0545

产品名称：丙酮酸激酶（PK）活性检测试剂盒

产品型号：BC0545

产品特点：丙酮酸激酶（PK）活性检测试剂盒
测定意义：PK（EC 2.7.1.40）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化糖酵解过程中的后一步反应，是糖酵解过程中的主要限速酶之一，也是产生ATP的关键酶之一，因此测定PK活性具有重要意义。
测定原理：PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸，乳酸脱氢酶进一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+，在340nm下测定NADH下降速率

BC0545丙酮酸激酶（PK）活性检测试剂盒的详细资料：

丙酮酸激酶(PK)活性检测试剂盒

操作步骤：

一、样本的前处理

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10 4个）提取液体积（mL）为 500-1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或者 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1:5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤及加样表：

1. 分光光度计预热 30min 以上，调节波长 340nm，蒸馏水调零。

2. 样本测定

（1） 在试剂二瓶中加入 17ml 试剂一和 1ml 蒸馏水充分溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃ （其他物种）水浴 5 分钟，现配现用。

（2） 在试剂三中加入 1ml 蒸馏水充分溶解，冰上放置备用，现配现用。

（3） 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、10μL 试剂三和 180μL 试剂二，混匀，立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2，计算△A=A1-A2.

 

PK 活性计算： A．用微量石英比色皿测定的计算公式如下：

1、 血清（浆）PK 活力的计算：单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1nmolNADH 定义为一个酶活力单位。 PK（U/mL）=[△A×V 反总÷（ε×d）×10 9] ÷V 样÷T=1608×△A

2、 组织、细菌或细胞中 PK 活力的计算:

（1） 按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmolNADH 定义为一个酶活力单位。 PK（U/mg prot）＝[△A×V 反总÷（ε×d）×10 9] ÷(Cpr×V 样)÷T=1608×△A ÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1nmolNADH 定义为一个酶活力单位。 PK（U/g 鲜重）＝[△A×V 反总÷（ε×d）×10 9] ÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1608×△A ÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算单位的定义：每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗 1nmolNADH 定义为一个酶活力单位。 PK（U/10 4 cell）＝[△A×V 反总÷（ε×d）×10 9] ÷(500×V 样÷V 样总)÷T=3.216×△A V 反总：反应体系总体积，2×10 -4L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10 3L/mol/cm；d：比色皿光径， 1 cm；V 样：加入样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，2min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

B．用 96 孔板测定的计算公式如下：

1、 血清（浆）PK 活力的计算：单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1nmolNADH 定义为一个酶活力单位。 PK（U/mL）=[△A×V 反总÷（ε×d）×10 9] ÷V 样÷T=3216×△A 2、 组织、细菌或细胞中 PK 活力的计算:

（1） 按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmolNADH 定义为一个酶活力单位。 PK（U/mg prot）＝[△A×V 反总÷（ε×d）×10 9] ÷(Cpr×V 样)÷T=3216×△A ÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1nmolNADH 定义为一个酶活力单位。 PK（U/g 鲜重）＝[△A×V 反总÷（ε×d）×10 9] ÷(W×V 样÷V 样总)÷T=3216×△A ÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算单位的定义：每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗 1nmolNADH 定义为一个酶活力单位。 PK（U/10 4 cell）＝[△A×V 反总÷（ε×d）×10 9] ÷(500×V 样÷V 样总)÷T=6.432×△A V 反总：反应体系总体积，2×10 -4L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10 3L/mol/cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，2min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

相关文献：

《Galangin and Pinocembrin from Propolis Ameliorate Insulin Resistance in HepG2 Cells via Regulating Akt/mTOR Signaling》 作者:Yinkang Liu, Xiali Liang,Gensheng Zhang,Lingjie Kong,Wenjun Peng and Hongcheng Zhang 期刊:Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine 影响因子:1.984 PMID:30420897
 

丙酮酸激酶(PK)活性检测试剂盒

提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：液体 20 mL×1 瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存；试剂三：液体×1 支，4℃保存；