脯氨酸（PRO）含量检测试剂盒（微量法）
产品名称：脯氨酸（PRO）含量检测试剂盒（微量法）
产品型号：
产品特点：脯氨酸（PRO）含量检测试剂盒（微量法）Pro广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内Pro含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。
脯氨酸（PRO）含量检测试剂盒（微量法）的详细资料：
脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒（微量法）说明书
货号:BC0255
规格: 100T/96S
脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒（微量法）产品简介：
HYP是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。
样品经水解产生游离的HYP，进一补被氯胺T氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应，产生红色化合物，在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值，可计算HYP含量。
产品内容：
组织提取液：6mol/L盐酸，自备。浓盐酸：H2O（V/V）= 1:1，室温保存；
细胞提取液：液体100mL×1 瓶，4 ℃保存；
试剂一：液体10mL×1 瓶，4 ℃避光保存；
试剂二：液体10mL×1 瓶，4 ℃避光保存。
脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒（微量法）操作步骤：
一、羟脯氨酸提取：
1. 组织：取约0.2g 样品于玻璃管，加入2mL的组提取液，置于110℃烘箱，水解612小时，16000rpm，25℃，离心20min，用提取液定容2mL，取上清待测。
2. 细胞：取约500 万个细胞，加入1mL 的细胞提取液，于高压消毒器中15 磅保持30min，自然降压后待测。
二、测定操作：
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对照管 |
测定管 |
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样本（uL） |
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60 |
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试剂一（uL） |
60 |
60 |
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混匀，室温静置20min |
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试剂二（uL） |
60 |
60 |
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H2O（uL） |
180 |
120 |
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混匀，60℃，20min，取出后室温静置15 min，测定A560。(A560=A测定-A对照) |
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羟脯氨酸含量计算：
用微量比色皿测定的计算公式:
标准曲线：y=64.875x+ 0.0251，R2=0.9991
（1）按组织计算
HYP含量（mg/g） =（A560-0.0251）÷64.875×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
=0.154×（A560-0.0251）÷W
（3）按细胞计算：
HYP含量（mg/104cell)= （A560-0.0251）÷64.875×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万个）
=0.077×（A560-0.0251）÷细胞数量（万个）
V反总：反应体系总体积，0.3mL； V样：反应中样本体积，0.06mL；V样总：加入提取液体积，mL； W：样本质量，g。
用96孔板测定的计算公式如下:
标准曲线：y=32.4375x+ 0.0251，R2=0.9991
（1）按组织计算
HYP含量（mg/g） =（A560-0.0251）÷32.4375×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
=0.308×（A560-0.0251）÷W
（3）按细胞计算：
HYP含量（mg/104cell)= （A560-0.0251）÷32.4375×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万个）
=0.154×（A560-0.0251）÷细胞数量（万个）
V反总：反应体系总体积，0.3mL； V样：反应中样本体积，0.06mL；V样总：加入提取液体积，mL； W：样本质量，g。
注意事项：
1、OD值大于0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2、试剂有一定的毒性，请操作时做好防护措施，防止吸入或与皮肤接触。