血蓝蛋白（KLH）（T细胞依赖性抗原）

大鼠免疫球蛋白M（IgM） ELISA试剂盒

 

　　药品的免疫毒性实验相关方针ICH S8中推荐在无特定免疫毒性标靶情况下进行的T细胞依赖性抗体产生实验（TDAR、T cell Dependent Antibody Reaction）。TDAR被称为T细胞依赖性抗原。例如：通过KLH（Keyhole limpet hemocyanin）的投放对一次抗原刺激而生成IgM性状抗体。接下来进行二次抗原刺激后通过类别转换作用可观察到产生IgG性状抗体。由于本试剂盒可简便测定大鼠血液中IgM性状的抗KLH浓度，所以最适合上文所述的目的。请与大鼠抗KLH-IgG检测试剂盒配套使用。

◆特点

●　测定时间短（总反应时间：2小时20分钟）。

●　微量样本即可测定。

●　使用无害的防腐剂。

●　全部试剂为溶液即用类型。

●　高测定精度和高重复性。

 

◆试剂盒组成

组成品	状态	包装
KLH包被96孔板	清洗后使用	96 wells（8×12）／1个
抗KLH大鼠IgM标准溶液（1000ng/mL）	稀释后使用	200μL/1瓶
缓冲液	直接使用	100mL/1瓶
HRP结合抗大鼠IgM抗体	稀释后使用	100μL/1瓶
显色液（TMB）	直接使用	12mL/1瓶
终止液（1M H2SO4）※小心轻放	直接使用	12mL/1瓶
浓缩清洗液（10×）	稀释后使用	100mL/1瓶
孔板密封膜		3个
产品说明书		1本

 

◆物种交叉性

2000ng/mL时数据—：无交叉性

动物种类	对象物质	反应性及反应率（%）
大鼠	IgM	100
	IgG	―
	IgA	―
	IgE	―
小鼠	IgG	―
	IgM	―
	IgE	―

 

◆样本信息

●　大鼠血清·血浆

●　50μL/well（稀释样本）

※　用附带的缓冲液将样本稀释至标准曲线范围内。

※　为了避免非特异反应发生，请将样本稀释200倍以上。

 

◆测定范围

3.13~200ng/mL

（标准曲线范围）

 

◆实验数据

精密度实验（实验内变化）

样本	A	B
1	49.5	164
2	47.7	166
3	48.0	164
4	47.6	161
5	49.7	169
Mean	48.5	165
SD	1.03	2.93
CV（%）	2.1	1.8

单位：ng/mL

重复性实验（实验间变化）

测定日/样本	E	F	G
0天	11.1	86.5	187
1天	11.1	86.1	188
2天	11.2	86.3	188
3天	11.1	83.3	186
Mean	11.1	85.6	187
SD	0.0576	1.48	0.814
CV（%）	0.52	1.7	0.44

单位：ng/mL，n=4

添加回收实验

样本C

添加量	实测值	回收量	回收率（%）
0.00	47.3	—	—
102	144	96.7	94.8
127	172	125	98.4
140	182	135	96.4

单位：ng/mL，n=2

样本D

添加量	实测值	回收量	回收率（%）
0.00	34.8	—	—
16.8	51.9	17.1	102
25.2	59.5	24.7	98.0
42.0	76.7	41.9	99.8

单位：ng/mL，n=2

稀释直线性实验

2个血清样本连续用稀释缓冲液稀释3个梯度测定结果，直线回归值R2=0.9965~0.9998