SuperSep Phos-tag 丙烯酰胺预制胶

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SuperSep Phos-tag 丙烯酰胺预制胶

包装：5块

  • 英文名：SuperSep Phos-tag
  • 别名：丙烯酰胺预制胶
  • 品牌：Wako

    • SuperSep Phos-tag丙烯酰胺预制胶,内含50uMPhos-tag丙烯酰胺,可用于磷酸化蛋白的分离。预制胶中含有锌作为金属离子，无需特异性磷酸化抗体或者同位素标记，在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好，结果条带清晰。预制胶打开包装即可直接使用。根据实验条件,Phos-tag预制胶有多款丙烯酰胺浓度和孔数可选,提供专门适合BioRad和Life Technologies电泳槽尺寸的预制胶。

    产品详情质检信息订购列表

    SuperSep Phos-tag™丙烯酰胺预制胶
    SuperSep Phos-tag 丙烯酰胺预制胶
    SuperSep Phos-tag™丙烯酰胺预制胶,内含50uMPhos-tag丙烯酰胺,可用于磷酸化蛋白的分离。预制胶中含有锌作为金属离子，无需特异性磷酸化抗体或者同位素标记，在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好，结果条带清晰。预制胶打开包装即可直接使用。根据实验条件,Phos-tag预制胶有多款丙烯酰胺浓度和孔数可选,提供专门适合BioRad和Life Technologies电泳槽尺寸的预制胶。
    Phos-tag™磷酸化亲和电泳原理
    SuperSep Phos-tag 丙烯酰胺预制胶
    SuperSep Phos-tag丙烯酰胺预制胶产品特点：
    ■ 即开即用 – 节约最宝贵的时间
    ■ 根据磷酸化程度分离磷酸化蛋白
    ■ 分离效果好，条带清晰
    ■ 无需磷酸化特异性抗体和放射性同位素标记
    SuperSep Phos-tag丙烯酰胺预制胶案例：
    (1）分离磷酸化和去磷酸蛋白
    SuperSep Phos-tag 丙烯酰胺预制胶
    [电泳缓冲液]
    Tris-甘氨酸-SDS 缓冲液

    [电泳样品]
    条带1: 未处理白蛋白
    条带2: 去磷酸化白蛋白

    [电泳条件] 20 mA, 70分钟
    [染色] CBB快速染色
    [脱色] 去离子水

    白蛋白(Wako# 010-17071)的去磷酸化，采用的是碱性磷酸酶(日本基因公司,货号319-02661)。条带迁移证明去磷酸化完成。
    (2）去磷酸化过程
    SuperSep Phos-tag 丙烯酰胺预制胶
    [电泳缓冲液]
    Tris-甘氨酸-SDS 缓冲液

    [电泳样品]
    条带1: β-酪蛋白 (碱性磷酸酶处理, 0 分钟)
    条带2: β-酪蛋白 (碱性磷酸酶处理, 15 分钟)
    条带3: β-酪蛋白 (碱性磷酸酶处理, 30 分钟)
    条带4: β-酪蛋白 (碱性磷酸酶处理, 45 分钟)
    条带5: β-酪蛋白 (碱性磷酸酶处理, 60 分钟)

    [电泳条件] 35 mA, 60分钟
    [染色] CBB快速染色
    [脱色] 去离子水

    β-酪蛋白按时间序列进行去磷酸化。结果证明磷酸化和去磷酸化β-酪蛋白分离开了。同时验证去磷酸化程度与时间相关。
    SuperSep Phos-tag丙烯酰胺预制胶产品列表
    1、适用于Bio-Rad电泳槽的预制胶
    Product Name Wako Cat. No. Pkg. Size
    SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%, 17 wells 83 x 100 x 3.9 mm
    198-17981
    5 gels
    SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 wells 83 x 100 x 3.9 mm
    195-17991
    5 gels
    2、适用于Life-technology电泳槽的预制胶
    Product Name Wako Cat. No. Pkg. Size
    SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%, 17 wells 100 x 100 x 6.6 mm
    192-18001
    5 gels
    SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 wells 100 x 100 x 6.6 mm
    199-18011
    5 gels
    3、适用于wako电泳槽的预制胶（>90 x 85 x 1 mm）
    Product Name Well Wako Cat. No. Pkg. Size
    SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 6%
    13 wells
    192-17401
    5 gels
    17 wells
    199-17391
    5 gels
    SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%
    13 wells
    195-17371
    5 gels
    17 wells
    192-17381
    5 gels
    SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%
    13 wells
    193-16711
    5 gels
    17 wells
    190-16721
    5 gels
    SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%
    13 wells
    195-16391
    5 gels
    17 wells
    193-16571
    5 gels
    SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%
    13 wells
    193-16691
    5 gels
    17 wells
    196-16701
    5 gels
    SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%
    13 wells
    197-16851
    5 gels
    17 wells
    194-16861
    5 gels
    SuperSep Phos-tag丙烯酰胺预制胶使用须知
    样品制备：
    Phos-tag SDS-PAGE对于蛋白样品中的杂质非常敏感，尤其是螯合剂，钒酸，无机盐，表面活性剂这类物质。
    强烈建议在Phos-tag SDS-PAGE之前通过TCA沉淀或渗析法降低杂质含量。

    转膜前处理：
    另一个必须的步骤是在转膜前，用EDTA去除凝胶中的金属离子（Mn2+或者Zn2+）； 该步骤可提高蛋白的转膜效率。

    1. 分别准备10 mmol/L 含EDTA和不含EDTA 两种1x transfer buffer。
    2. 将凝胶浸泡在含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，至少20分钟，温和摇晃。更换新缓冲液，重复3次。
    3. 将凝胶浸泡在不含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，10分钟，温和摇晃。
    4. 转膜操作*。

    * 建议用湿法转膜，以提高转膜效率。