描述
Bio-Rad 负染色法基于凝胶中金属离子的选择性析出,从而留下未染色和未改性的蛋白质条带。 由于蛋白未经修饰,因此它与下游应用(如质谱分析)完全相容。 它们是简单快速的过程,需要不到 15 分钟就可完成。 Bio-Rad 针对聚丙烯酰胺凝胶染色提供了两种类型的负染色试剂,这两种试剂的灵敏度均高于考马斯亮蓝 R–250 染料。
锌染 – Bio-Rad 锌染和脱色试剂盒源于 Fernandez-Patron 等人 (1992) 的方法,是适用于 SDS- PAGE 凝胶的可逆负染方法。 通过简单的三步染色程序,即可在大约 15 分钟内将负染色带可视化。 凝胶不透明的白色背景可产生高对比度,便于在暗背景下查看时显示清晰的条带。 凝胶可以在 15 分钟内完全脱色,从而允许对样本执行Western 杂交、氨基酸分析或 N 端测序。
铜染 – Bio-Rad 铜染和脱色试剂盒源于 Lee 等人 (1987) 的方法,只需 10 分钟即可在 SDS-PAGE 凝胶上清晰显示蛋白质条带。 由于蛋白质经过负染色,因此无需任何脱色步骤即可看见带。 蛋白质以可逆方式固定在凝胶中,从而能够在执行 15 分钟的脱色步骤后进行洗脱或印迹。 铜染较考马斯亮蓝 R–250 染料的灵敏度更高。
参考
Fernandez-Patron C et al. (1992). 通过咪唑锌盐对十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶进行反向染色: 灵敏检测未修饰的蛋白。 Biotechniques 12, 564–573.
Lee C et al. (1987). 铜染: 针对十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶的五分钟蛋白染色剂。 Anal Biochem 166,308–312。
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