D2810 DNA退火缓冲液
产品名称:D2810 DNA退火缓冲液
产品型号:
产品特点:D2810 DNA退火缓冲液保存条件:-20℃保存,一年有效。
D2810 DNA退火缓冲液的详细资料:
D2810 DNA退火缓冲液
把要退火的DNA oligo用经灭菌的三蒸水配制成50μM。解冻Annealing Buffer for DNA Oligos(5X),混匀备用。如经常使用,本Buffer可放置2-8℃一个月。
2. 如下设置退火反应体系:
Annealing Buffer for DNA Oligos(5X) | 20μl |
DNA oligo A(50μM) | 20μl |
DNA oligo B(50μM) | 20μl |
Nuclease-Free Water | 40μl |
总体积 | 100μl |
按照上述顺序依次加入各种试剂,混匀。放入PCR仪。
3. 如下设置PCR仪进行退火反应:
步骤 | 温度 | 时间 | 说明 |
1 | 95℃ | 2分钟 | 让oligo充分变性 |
2 | 每8秒下降0.1℃,降25℃(注1) | 约90分钟 | 退火 |
3 | 4℃ | 长时间保持 | 暂时存放 |
注1:如果所用的PCR仪不具备下降0.1℃的功能,也可以设置为每90秒下降1℃。
4. 退火结束后可以直接用于连接反应,也可以在-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应,好用纯化试剂盒进行纯化,或者确保退火产物在反应体系中体积不超过10%,以避免AnnealingBuffer对后续的酶反应体系的干扰。